Uma técnica para gerar um modelo de camundongo com artrite induzida por adjuvante

Resumo

Fonte: Lu, Q., et al. Detectando Migração e Infiltração de Neutrófilos em Camundongos. J. Vis. Exp. (2020).

Este vídeo demonstra um método para gerar artrite induzida por adjuvante em um modelo murino. O adjuvante completo de Freund (CFA) é injetado na articulação do tornozelo do camundongo e nas áreas periarticulares. O CFA ativa o sistema imunológico, levando à infiltração de neutrófilos e inflamação exagerada.

Protocolo

Todos os procedimentos envolvendo modelos animais foram revisados pelo comitê institucional local de cuidados com animais e pelo conselho de revisão veterinária JoVE.

1. Indução do modelo de camundongo com artrite induzida por adjuvante (AA)

1. Suspenda o adjuvante de Freund completo (CFA) por vórtice por pelo menos 5 s e, em seguida, retire 100 μL de suspensão em um injetor de insulina.
   nota: Recomendamos o uso de um CFA completamente novo em experimentos para garantir a esterilidade.
2. Anestesiar os ratos conforme descrito.
3. Marque a pata escolhida e injete 20 μL de CFA no espaço articular do tornozelo. Injete 20 μL de suspensão em quatro pontos periarticulares na pata escolhida (80 μL no total).
4. Remova os ratos da unidade de respiração e coloque os ratos processados em uma nova câmara. Monitore os ratos para garantir que eles estejam respirando até que recuperem a capacidade de se mover.
5. A cada 3 dias, avalie o diâmetro da articulação medindo o diâmetro da articulação do tornozelo usando um medidor de espessura de bolsa (Figura 1A).
6. A cada 3 dias, avaliar a gravidade da artrite pelo critério de pontuação da artrite (Figura 1C): 0, normal, sem evidência de eritema e inchaço; 1, artrite mais leve, eritema e inchaço leve confinado aos tarsos ou articulação do tornozelo; 2, artrite moderada, eritema e inchaço leve que se estende do tornozelo aos tarsos; 3, artrite grave, eritema e inchaço moderado que se estende do tornozelo às articulações metatarsais; 4, A artrite, eritema e inchaço grave mais graves abrangem o tornozelo, pé e dedos, ou anquilose do membro.

Resultados

Figura 1: Resultados representativos do modelo de camundongo com artrite induzida por adjuvante (AA). (A) O diâmetro da articulação do tornozelo foi medido usando um medidor de espessura de bolsa. (B) O inchaço articular foi avaliado com base no diâmetro articular do tornozelo (n = 7). (C) Fotos de cada escore de artrite. (D) A gravi...

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Tubo de centrífuga cônico de polipropileno de 15 mL	falcão	14-959-53UMA
23 G x 1 1/4" Agulha	Bd	Rolamento 305120
Agulha de 26 G x 3/8"	Bd	Rolamento 305110
Agulha de 30 G x 1/2"	Bd	305106
Adjuvante de Freund completo, 10 mg/ml	sigma	1002036152
Microtubos Eppendorf, 1,5 mL	sigma	Z606340
Medidor de espessura do mostrador	Mitutoyo	Nº 7301
Shu Rui U40 Agulha de Injeção de Insulina Estéril Descartável 1 mL	Bd	328421