Geração de um modelo de cultura de células in vitro de coinfecção malária-HIV

Resumo

Fonte: Finney, C. et al., Um modelo in vitro para medir as respostas imunes à malária no contexto da coinfecção pelo HIV.J. Vis. Exp.(2015)

Este vídeo demonstra a geração de um modelo de cultura de células de coinfecção malária-HIV in vitro. Células mononucleares do sangue periférico infectadas pelo HIV co-cultivadas com eritrócitos parasitados por Plasmodium falciparum potencialmente apoiam o crescimento uns dos outros e fornecem informações sobre as respostas imunes e a progressão da doença nas coinfecções por HIV e malária.

Protocolo

Todos os procedimentos que envolvem coleta de amostras foram realizados de acordo com as diretrizes do IRB do instituto.

CUIDADO: Trabalhar com amostras de sangue humano e parasitas da malária humana requer medidas de precaução. Sempre use jaleco e luvas e trabalhe em um gabinete de biossegurança de nível 2. Em caso de exposição percutânea acidental à malária humana, informe a Saúde e Segurança para tratamento profilático. Considerações adicionais de segurança também devem ser implementadas para trabalhar com sangue HIV (+) do vírus da imunodeficiência humana. Use um jaleco com fechamento traseiro. Luva dupla (a luva superi....

Resultados

Figura 1. Representação do gradiente Ficoll pós-spin demonstrando a posição dos PBMCs.

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Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
alanina	sigma	Resposta A7377
Solução BD Vacutainer ACD A	Bd	364506
BD Vacutainer Heparina Sódica	Bd	17-1440-02
DPBS (sem cálcio, sem magnésio)	Corning	21-031-CV
Soro fetal bovino	sigma	F1051	Inativar o calor antes de usar
Ficoll-Paque PLUS	GE Saúde	17-1440-02
Gentamicina (10mg/ml)	Gibco	Rolamento 15710-064
Conjunto de coloração Hema3	pescador	122-911
HEPES	pescador	BP310-500
Hipoxantina	sigma	H9636
Ionomicina	sigma	I3909
Aminoácidos não essenciais MEM (10mM)	Gibco	11140
Pma	sigma	Pág. 8139
Pó RPMI-1640	Tecnologias de Vida	Rolamento 31800-022
RPMI-1640 com L-glutamina e HEPES	Thermo Científico	SH30255.01
Bicarbonato de sódio (pó, cultura de células)	sigma	S5761
Piruvato de sódio (100mM)	Gibco	11360
Tris (base Trizma)	sigma	T6066
Trizol	Ambion	15596018
Azul de Tripano (0,4%)	Gibco	Rolamento 15250-061
Mistura de Gases Parasitas	Por encomenda especial		3% CO2, 1% O2, equilíbrio N2