Canulação da artéria carótida em modelo de rato

Resumo

Fonte: Trevaskis, N. L. et al., O Modelo de Rato Canulado do Ducto Linfático Mesentérico: Aplicação à Avaliação do Transporte de Drogas Linfáticas Intestinais. J. Vis. Exp. (2015)

Neste vídeo, demonstramos um procedimento cirúrgico para canular a artéria carótida esquerda em um modelo de rato.

Protocolo

Todos os procedimentos envolvendo modelos animais foram revisados pelo comitê institucional local de cuidados com animais e pelo conselho de revisão veterinária JoVE.

1. Canulação da artéria carótida

A canulação da artéria carótida pode ser realizada antes ou depois da canulação do ducto linfático mesentérico. Alguns operadores preferem canular a artéria carótida antes de canular o ducto linfático, de modo a reduzir o potencial desalojamento da cânula linfática ao mover o animal.

1. Coloque uma marca na cânula da artéria carótida a 2,5 cm da ponta chanfrada para identificar a parte do tubo a ser inserida na artéria. Conecte a outra extremidade da cânula (ou seja, sem chanfro) a uma agulha de 23 ou 25 G conectada a uma seringa cheia de solução anticoagulante e encha a cânula com a solução anticoagulante, certificando-se de que não haja espaços de ar.
2. Para facilitar a canulação, coloque o rato anestesiado em decúbito dorsal com o pescoço esticado e a cabeça apontando para o operador. Observe que alguns operadores preferem realizar essa técnica com a cauda do rato apontando para o operador.
3. Coloque uma incisão longitudinal de 1 a 1,5 cm através da camada de pele acima da esquerda da traqueia no plano sagital.
4. Disseque o tecido conjuntivo subcutâneo usando uma pinça de ponta romba para expor os músculos subjacentes do pescoço emparelhados.
5. Retraia os músculos do pescoço para revelar a artéria carótida esquerda (localizada ~ 1 cm abaixo da superfície da pele e pulsante). Limpe o tecido conjuntivo sobrejacente da artéria por dissecção romba.
6. Isole uma seção de ~ 1 cm da artéria cuidadosamente usando uma pinça de tecido rombudo, tomando cuidado para não danificar o trato nervoso vago adjacente. Faça isso abrindo e fechando a pinça de ponta romba verticalmente ao longo de ambos os lados da artéria para liberá-la do tecido circundante e do nervo vago.
7. Usando uma pinça de ponta fina, passe duas suturas de seda sob a artéria carótida e coloque-as em cada extremidade da seção isolada da artéria. Amarre a sutura mais próxima do operador e mais distante do coração e da clavícula do rato (Figura 1A).
8. Oclua o fluxo sanguíneo através da artéria colocando um par de pinças retas de ponta fina embaixo da artéria (Figura 1B).
9. Usando a tesoura de íris de ponta fina, coloque uma pequena incisão na superfície superior da artéria (cerca de 1/3 do caminho para baixo do topo da área isolada). Lave qualquer sangue derramado na superfície da artéria com solução salina heparinizada e limpe suavemente com pontas de algodão.
10. Insira a ponta da cânula na artéria com um par de pinças de ponta curva. Uma vez inserida, remova a pinça de ponta fina reta que oclui o fluxo sanguíneo e avance a cânula 2,5 cm para dentro da artéria usando dois pares de pinças, uma para segurar a cânula dentro da artéria para impedir que o sangue vaze de volta e a outra para inserir a cânula.
11. Use uma pequena pinça de artéria para segurar a cânula dentro da artéria e remova a pinça de ponta fina reta que foi colocada abaixo da artéria na etapa 1.8 para obstruir o fluxo sanguíneo.
12. Confirme a permeabilidade da cânula injetando uma solução anticoagulante na cânula e retirando uma pequena quantidade de sangue (Figura 1C). Em seguida, lave a cânula com uma solução anticoagulante e sele a extremidade usando a chama de um isqueiro ou um tampão de cânula.
13. Amarre a cânula no lugar com as duas suturas colocadas sob a artéria na etapa 1.8.
14. Remova a pinça da artéria e prenda uma terceira sutura ao redor da artéria e da cânula. Feche a ferida no pescoço com suturas.

Resultados

Figura 1. Fotografias de (A) a artéria carótida isolada com duas suturas de seda com a mais próxima do operador amarrada, (B) a artéria carótida isolada e o fluxo sanguíneo ocluído com um par de pinças retas de ponta fina colocadas embaixo da artéria, e (C) uma artéria carótida com a cânula no lugar e a permeabilidade sendo verificada puxando uma peq...

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Solução salina estéril	Baxter saúde	AHB 1307	Qualquer marca pode ser usada. Exemplo aqui são os sacos de solução salina Baxter de 100 ml, caixa de 50
70 % de etanol em água	qualquer		Qualquer marca pode ser usada
Heparina (35000I.U. em 35 mL)	Sigma Farmacêutica	Rolamento 337220	http://sigmaco.com.au/
Cânula de polietileno (PE) o.d. 0,96 mm x i.d. 0,58 mm	Extensões de microtubos	PE8050	Qualquer marca pode ser usada. Exemplo aqui é a tubulação PE 0,8x0,5 mm, 30 m
Cânula de polietileno (PE) o.d. 0,8 mm x i.d. 0,5 mm	Extensões de microtubos	PE9658	Qualquer marca pode ser usada. Exemplo aqui é a tubulação PE 0,96x0,58 mm, 30 m
régua	qualquer		Qualquer marca pode ser usada
Marcadores	qualquer		Qualquer marca pode ser usada
isqueiro	qualquer		Qualquer marca pode ser usada
Agulhas de calibre 23	Aeroporto Internacional de Livingstone	DN23GX0.75LV	Qualquer marca pode ser usada. Exemplo aqui é a Agulha Descartável Livingstone, Estéril, 23GX0.75inch, 100/BOX. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&CAT= 6&search=DN23GX0.75LV
Agulhas de calibre 25	Aeroporto Internacional de Livingstone	DN25GX1.0LV	Qualquer marca pode ser usada. O exemplo aqui é a Agulha Descartável Livingstone, Estéril, 25GX1.0inch, 100/BOX. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&CAT=6&search= DN25GX1.0LV
Seringa de 1 ml	Aeroporto Internacional de Livingstone	T3SS01TA	Qualquer marca pode ser usada. Exemplo aqui é a seringa Terumo 1 ml Slip Tuberculin 100/Box. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&CAT=6&search =T3SS01TA
Seringa de 10 ml	Aeroporto Internacional de Livingstone	T3SS10SA	Qualquer marca pode ser usada. Exemplo aqui é a seringa Terumo 10 ml Slip 100/Box. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&CAT=6&search =T3SS10SA
Cotonetes de gaze	Aeroporto Internacional de Livingstone	GSC075	Qualquer marca pode ser usada e cortada no tamanho necessário. Exemplo aqui é cotonetes de gaze de algodão preenchidos 7,5x7,5 cm, 8 camadas. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&CAT=6&search =GSC075
Cotonetes	Aeroporto Internacional de Livingstone	CTAST075DP	Qualquer marca pode ser usada. Exemplo aqui é o aplicador de algodão Livingstone com ponta dupla de plástico. 75MM. 100/PK. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&CAT=6&search =CTAST075DP
Sutura de seda	Aeroporto Internacional de Livingstone	DTSK163019F4
Lâminas de bisturi	Ferramentas de Belas Ciências (FST)	10020-00	Qualquer marca pode ser usada. Exemplo aqui é a lâmina de bisturi FST # 20. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=191
Cabo de bisturi	Ferramentas de Belas Ciências (FST)	10004-13	Qualquer marca pode ser usada. Exemplo aqui é o cabo de bisturi FST #4. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=298&CategoryId=51
1 x tesoura cirúrgica pequena	Ferramentas de Belas Ciências (FST)	14060-09	Qualquer marca pode ser usada. Exemplo aqui é a tesoura fina FST, 9 cm com aresta de corte de 21 mm, afiada, reta. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=40&CategoryId=17
2 x fórceps com ponta curva serrilhada	Ferramentas de Belas Ciências (FST)	11001-13	Qualquer marca pode ser usada. Exemplo aqui é a pinça de padrão padrão FST de 13 cm com ponta curva de 2,8x1,4 mm. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=405&CategoryId=32
1 x tesoura de iridectomia	Ferramentas de Belas Ciências (FST)	15000-08	Qualquer marca pode ser usada. Exemplo aqui é a tesoura de mola FST Vannas - aresta de corte de 2,5 mm, reta. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=17&CategoryId=16
1 x fórceps com ponta serrilhada reta	Ferramentas de Belas Ciências (FST)	11650-10	Qualquer marca pode ser usada. Exemplo aqui é FST Graefe 10 cm reto com ponta serrilhada de 1 x 0,99 mm. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=390&CategoryId=32
1 x fórceps com ponta fina reta afiada lisa	Ferramentas de Belas Ciências (FST)	11251-10	Qualquer marca pode ser usada. Exemplo aqui é a pinça FST Dumont #5 reta de 11 cm com ponta de 0,08 x 0,04 mm. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=335&CategoryId=29
1 x fórceps com pinça curva fina e lisa	Ferramentas de Belas Ciências (FST)	11063-07	Qualquer marca pode ser usada. Exemplo aqui é a pinça FST Delicate 9 cm com ponta lisa de 0,4 x 0,3 mm. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=360
1 x suporte de agulha de sutura	Ferramentas de Belas Ciências (FST)	12001-13	Qualquer marca pode ser usada. Exemplo aqui é o porta-agulhas FST 13cm Hasley com ponta de 16 mm de comprimento x 1,9 mm de largura. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=254&CategoryId=70
1 x braçadeira de artéria	Ferramentas de Belas Ciências (FST)	18050-28	Qualquer marca pode ser usada. Exemplo aqui é FST Bulldog Serrefines reto, 28 mm de comprimento, dimensão de mandíbula de 9x1,6 mm com prensa de grampo médio. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=270&CategoryId=82