Estabelecendo um modelo de camundongo de câncer de pulmão disseminado pleural

Neste artigo

Resumo

Fonte: Yasui, H., et al. Fotoimunoterapia de infravermelho próximo para modelos de camundongos de disseminação pleural. J. Vis. Exp. (2021)

Este vídeo demonstra um método para gerar um modelo de disseminação pleural em camundongos injetando suspensão de células de câncer de pulmão na cavidade torácica de um camundongo imunodeficiente.

Protocolo

Todos os procedimentos envolvendo modelos animais foram revisados pelo comitê institucional local de cuidados com animais e pelo conselho de revisão veterinária JoVE.

1. Geração de um modelo de disseminação pleural

Prepare as células-alvo que expressam luciferase e suspenda 1,0 × 10⁶ células-alvo em 100 μL de solução salina tamponada com fosfato (PBS)
nota: Células cancerígenas intratorácicas, como câncer de pulmão e MPM, são adequadas como células-alvo. As células que expressam luciferase foram preparadas por meio da transfecção do gene da luciferase, e a alta expressão da luciferase foi confirmada após > 10 passagens celulares. As células foram cultivadas em meio suplementado com 10% de penicilina fetal bovina (100 UI/mL) e estreptomicina (100 mg/mL). O número de células foi ajustado de acordo com a taxa de crescimento do tumor e o tempo de tratamento (1,0. × 10 5-6,0 × 10⁶ células/peso corporal).
Prepare camundongos fêmeas homozigotos atímicos nude de 8 a 12 semanas de idade, com um peso corporal preferível de 19 a 21 g.
Anestesiar camundongos durante o procedimento com isoflurano (introdução: 4-5%, manutenção 2-3%); pressionar a cauda com uma pinça para confirmar que não há reação.
Faça uma rolha com espuma de poliestireno e prenda a rolha à agulha de 30 G de forma que a ponta permaneça a 5 mm para evitar lesões pulmonares. Dobre a ponta da agulha com uma pinça limpa ou pressionando-a contra um objeto duro limpo com EtOH 70% para evitar pneumotórax (Figura 1).
cuidado: Tenha cuidado para não se perfurar. Use uma pinça para dobrar a agulha. Não segure a rolha ao prendê-la à agulha. É mais seguro enfiar a rolha antes de encher as células na seringa.
Encha uma seringa (1 ml) com células-alvo e coloque uma agulha de 30 G com uma rolha.
Desinfete o tórax do animal com EtOH 70% antes do procedimento.
Perfure uma agulha no peito do camundongo através do espaço intercostal. Devido à resistência ao bater contra as costelas naquele momento, a ponta da agulha se movia para cima e para baixo. Após passar pelo espaço intercostal, pressione a seringa contra o camundongo e injete 100 μL de células-alvo (Figura 2).
nota: O rato respira profundamente quando a agulha entra corretamente na cavidade torácica. Com a flexão da ponta da agulha, o pneumotórax e a injeção inadequada de células no pulmão poderiam ser evitados.
nota: A punção da parede torácica direita é recomendada para evitar o risco de punção da parede cardíaca.
Role o mouse 2-3 vezes para espalhar as células por toda a cavidade torácica.
Retorne o mouse para uma gaiola limpa e quente e monitore até o ambulatório. Após o procedimento, o mouse acordará da anestesia e se comportará normalmente.

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Resultados

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Figura 1: Dispositivo fácil feito à mão para transplante de células. Prenda a rolha feita com espuma de poliestireno à agulha 30G de forma que a ponta permaneça em 5 mm. A ponta da agulha deve ser dobrada para evitar pneumotórax.

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Figura 2: Injeção de células-al...