Coloração com fluoresceína em um modelo de rato de olho seco autoimune para examinar danos na córnea

Resumo

Fonte: Hou Ahiua, et al. Um modelo de rato de olho seco autoimune crônico com aumento de células T de memória efetoras no tecido do globo ocular. J.Vis. Exp. (2017)

Este vídeo demonstra a coloração da córnea danificada usando corante de fluoresceína para avaliar a extensão da doença autoimune do olho seco em um modelo de rato. As manchas verdes de fluorescência das fibras de colágeno manchadas indicam células danificadas epiteliais da córnea.

Protocolo

Todos os procedimentos envolvendo modelos animais foram revisados pelo comitê institucional local de cuidados com animais e pelo conselho de revisão veterinária JoVE.

1. Avaliação das características do olho seco

Meça os danos na córnea com coloração com fluoresceína.

1. Adicione 2 μL de fluoresceína a 0,2% à córnea de rato. Abra e feche passivamente as pálpebras do rato 3 vezes com um dedo enluvado para espalhar o corante de fluoresceína na superfície do olho.
2. Após 1 min, retire 1 mL de solução salina com uma seringa de 3 mL (sem qualquer acessório de agulha), posicione a seringa cerca de 2-3 mm antes da córnea e impulsione suavemente a solução salina para o olho.
3. Adquira imagens sob o filtro azul cobalto (ou seja, ~ 400 nm) de um microscópio de imagem ocular com as luzes de fundo desligadas.
   nota: As imagens foram posteriormente analisadas por um sistema de classificação modificado a partir de publicações anteriores. As imagens foram então analisadas graduando-se subjetivamente o número, a área e a intensidade das manchas verdes de 0 a 2, onde 0 indica sua ausência, 1 indica coloração pontilhada de menos de 50 manchas e 2 indica coloração puntiforme de mais de 50 manchas.

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Reagente
Solução de fluoresceína sódica	Bausch & Lomb U.K Limited	NA
equipamento
Microscópio estéreo com iluminador de luz de anel e câmera	Carl Zeiss	NA