Indução de encefalomielite autoimune experimental em modelo de camundongo

Resumo

Fonte: Barthelmes, J. et al., Indução de encefalomielite autoimune experimental em camundongos e avaliação da distribuição dependente de doença de células imunes em vários tecidos.J. Vis. Exp.(2016)

O vídeo demonstra a indução de encefalomielite autoimune experimental em um modelo de camundongo injetando uma combinação de glicoproteínas de oligodendrócitos de mielina e Mycobacterium tuberculosis inativado. O modelo permite que os pesquisadores estudem os mecanismos da doença e testem intervenções terapêuticas.

Protocolo

Todos os procedimentos envolvendo modelos animais foram revisados pelo comitê institucional local de cuidados com animais e pelo conselho de revisão veterinária JoVE.

1. Encefalomielite autoimune experimental ou modelo EAE

1. Indução do modelo EAE
   1. Use camundongos fêmeas 129S4 / SvJae × C57BL / 6 de 10 a 13 semanas de idade para a indução de EAE.
   2. Administrar aos camundongos uma injeção subcutânea, na parte superior e inferior das costas, do peptídeo encefalitogênico MOG_{35 - 55} (glicoproteína de oligodendrócitos de mielina) (200 μg), emulsionado em 200 μl de adjuvante de Freund completo (CFA) contendo 400 μg de Mycobacterium tuberculosis.
      nota: Como controle simulado negativo, não indutor de doença, pode-se usar adjuvante de Freund incompleto contendo Mycobacterium tuberculosis, no mesmo volume e pela mesma via.
   3. Em seguida, e novamente 24 horas depois, dê aos camundongos uma injeção intraperitoneal de toxina coqueluche (no total 0,2 μg, diluída em 200 μl de solução salina tamponada com fosfato, PBS). Use camundongos não tratados como grupo controle, para poder comparar animais doentes com saudáveis.
      nota: Também é possível induzir EAE com 200 - 300 μg de peptídeo MOG_{35 - 55}, 300 - 500 μg de Mycobacterium tuberculosis no CFA e 0,2 - 0,3 μg de toxina pertussis em um volume de 0,1 - 0,2 ml por injeção.
   4. A partir de uma semana após a injeção, examine os camundongos diariamente quanto a sintomas clínicos (consulte a etapa 1.2.1)
      nota: O dia do início da doença varia em diferentes experimentos, mas sob as condições em nosso laboratório, isso ocorre por volta do dia 11 e, portanto, aqui o dia 14 é definido como 3 dias após o início da doença. Todos os camundongos do presente estudo desenvolveram sintomas clínicos.

2. Pontuação dos ratos

1. Classifique os sintomas clínicos por escores clínicos da seguinte forma: 0) sem sinais, 0,5) paralisia distal da cauda, 1) paralisia completa da cauda, 1,5) cauda flácida e fraqueza leve das patas traseiras, 2) cauda flácida e fraqueza severa das patas traseiras, 2,5) cauda flácida e paralisia de uma perna traseira, 3) cauda flácida e paralisia de ambas as patas traseiras, 3.5) paralisia de ambos os membros posteriores e fraqueza de um membro anterior (camundongos que atingiram essa pontuação foram sacrificados, de acordo com as diretrizes éticas locais).

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Kit EAE	Hooke Laboratories, Lawrence, EUA	EK2110