Um ensaio bactericida sérico para a atividade bactericida mediada por complemento de anticorpos

Abstract

Fonte: Weerts, H. P., et al. Um ensaio bactericida específico de Shigella de alto rendimento. J. Vis. Exp. (2019).

Este vídeo demonstra uma técnica para avaliar a atividade bactericida mediada por complemento de anticorpos presentes no soro. Essa abordagem combina soro isolado com bactérias patogênicas e proteínas exógenas do complemento. Após a incubação, as bactérias são cultivadas em uma placa de ágar e as colônias produzidas são quantificadas para medir o título bactericida sérico.

Protocol

1. Prepare o complemento e as bactérias-alvo

1. Prepare o complemento de coelho bebê (BRC)
   NOTA: Critérios detalhados para seleção de lotes complementares podem ser encontrados aqui: https://www.vaccine.uab.edu/uploads/mdocs/UAB-MOPA.pdf
   1. Obtenha BRC congelado e descongele com água fria corrente. Misture fisicamente o BRC a cada ~ 10-20 min até descongelar completamente. Não sujeite o BRC a ciclos repetidos de congelamento e descongelamento.
   2. Enquanto o BRC está descongelando, rotule os tubos de centrífuga de 1,5 mL, 5 mL ou 15 mL. Coloque os tubos rotulados no gelo para pré-esfriar. Alíquota do vo....

Results

Figura 1: Placas de LBA após o desenvolvimento da cor. As microcolônias bacterianas representativas de S. flexneri 3a cresceram durante a noite até o tamanho apropriado. O ágar de sobreposição foi adicionado e as colônias desenvolveram uma cor vermelha pela redução do composto TTC no ágar de sobreposição.

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
gelatina	sigma	G9391	Tipo B, em pó, BioReagent, adequado para cultura de células
TTC (cloreto de 2,3,5-trifeniltetrazólio)	sigma	T8877	≥98,0% (HPLC)
Azida sódica (NaN3)	sigma	S2002	≥99,5%
Complemento Coelho Bebê	PelFreez	Rolamento 31061-3	3-4 semanas de idade
HBSS com Ca2+/Mg2+	Invitrogen	14065-56	Sem Fenol Vermelho
Ágar LB (Lennox)	sigma	L2897	Meio de crescimento microbiano em pó
Ágar Bacto	Bd	Rolamento 214010	Em pó, (C12H18O9)n
Glicerol	sigma	G5516	Para biologia molecular, ≥99%
Caldo LB (Lennox)	sigma	L3022	Meio de crescimento microbiano em pó
Placa de Petri quadrada	sigma	Z617679-240EA	120 mm x 120 mm
Placa de ensaio	Costar	3799	96 bem placa de fundo em U com tampa
Software NICE	Universidade do Alabama em Birmingham		ftp://ftp.nist.gov/pub/physics/mlclarke/NICE/