Detecção de ligação de vitronectina a superfícies bacterianas usando citometria de fluxo

Neste artigo

Resumo

Fonte: Singh, B. et al., Ensaios para estudar o papel da vitronectina na adesão bacteriana e resistência sérica.J. Vis. Exp.(2018)

Este vídeo demonstra a detecção da interação da vitronectina com proteínas de superfície bacteriana. A análise por citometria de fluxo mede o sinal de fluorescência de anticorpos marcados com fluorescência ligados à vitronectina, confirmando sua presença na superfície bacteriana. Essa técnica fornece informações sobre as interações patógeno-hospedeiro e possíveis terapias de infecção bacteriana.

Protocolo

1. Análise de Vitronectina, Vn como um ligante de proteína de superfície bacteriana

Detecção de ligação de Vn na superfície bacteriana usando citometria de fluxo
nota: Na citometria de fluxo, usamos espalhamento lateral e espalhamento direto para eventos positivos. Para examinar as interações com Vn, Haemophilus influenzae tipo f, isolados clínicos Hif (n=10) foram selecionados juntamente com E. coli BL21 (DE3) como controle negativo (Figura 1A).
1. Cultura de isolados clínicos Hif em meio de infusão cérebro-coração (BHI) suplementado com 10 μg/mL de nicot....

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Resultados

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Figura 1: Haemophilus influenzae sorotipo f se liga a Vn via PH expresso na superfície.(A) Resultados da citometria de fluxo mostrando a ligação de Vn às células de isolados clínicos de Hif. Cada isolado clínico (5 x 10⁶ UFC) foi incubado com 250 nM de Vn humano. O ligante ligado foi detectado usando pAbs anti-Vn de ovelhas e anticorpos secundário.......