Um procedimento de recorte de cauda de camundongo para coleta de sangue periférico e isolamento de plasma

Resumo

Fonte: Coats, J. S. et al., Expressão de citocinas exógenas em xenoenxertos derivados de pacientes por injeção com uma linha de células estromais transduzida por citocina. J. Vis. (2017)

Neste vídeo, demonstramos um procedimento de corte de cauda em um modelo de camundongo para coletar sangue periférico. O sangue coletado é posteriormente submetido à centrifugação para separar o plasma, que pode ser usado para experimentos posteriores.

Protocolo

Todos os procedimentos envolvendo modelos animais foram revisados pelo comitê institucional local de cuidados com animais e pelo conselho de revisão veterinária JoVE.

1. Coleta de sangue seriada e monitoramento de plasma para citocinas humanas exógenas em camundongos

1. Coleta de sangue via corte de cauda
   1. Desinfete a capa de biossegurança e monte o limitador de mouse, tesoura e outras ferramentas/suprimentos para o procedimento.
   2. Coloque o mouse em uma contenção e prenda o tubo para minimizar o movimento do mouse.
   3. Desinfete a cauda e a tesoura cirúrgica com álcool isopropílico. Aplique creme anestésico tópico na cauda.
   4. Usando uma tesoura cirúrgica muito afiada, corte cerca de 0,5 a 1 mm da ponta da cauda do rato. Coletar aproximadamente 80 μL de sangue periférico com tubos capilares heparinizados.
      nota: Se o sangue for coletado com este método mais de seis vezes, a remoção da cauda deve ser conservadora em relação à quantidade de cauda removida. À medida que os cortes progridem pela cauda, o diâmetro aumenta, hemorragia mais rápido e a cicatrização leva mais tempo.

2. Separação de plasma

1. Transfira o sangue usando uma seringa de bulbo (para expulsá-lo dos tubos capilares) para um tubo de microtainer K₂EDTA rotulado; inverta 20 vezes para evitar a coagulação.
   nota: Normalmente, a coagulação do sangue do beliscão da cauda é rápida. No entanto, se a hemorragia persistir por mais de ~ 2 minutos, use um lápis/pó hemostático para ajudar na coagulação.
2. Centrifugar os tubos de colheita de sangue de acordo com as instruções do fabricante e alíquota do plasma para armazenamento (-20 °C) até estar pronto para análise posterior.

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Nano Transponder Implantável Animal com Cânula	Trovan	ID-100B(1.25)
Creme anestésico de lidocaína EMLA (obtido por prescipção através de instalações de cuidados com animais)	prescrição	prescrição
Seringa de insulina BD 1/2 cc LO-DOSE U-100 28G1/2	Bd	#329461
Tubos BD Microtainer com K2EDTA	Bd	#365974
centrifuga	Beckman Coulter	Alegra X-15R
Tubos capilares da marca Fisher (heparinizados)	Fisher Científico	Telefone: 22-260-950
Hemocitômetro	pescador	02-671-6
Analisador MACSQuant 10	Miltenyi Biotec	130-096-343
Gaiola de torta de rato	Braintree Scientific, Inc.	MPC-1
Limitador de Iluminador de Cauda de Mouse	Braintree Scientific, Inc.	MTI STD
Implantador de punho de pistola	Trovan	IM-300 (1,25)
"Ratos NSG" NOD. Cg-Prkdcscid Il2rgtm1Wjl/SzJ, masculino ou feminino, idade 6 – 8 semanas	Ratos JAX	# 005557