Medição de TEER em células epiteliais irradiadas por raios-X co-cultivadas com PBMCs

Resumo

Fonte: Babini, G., et al. Um método de co-cultura para investigar a diafonia entre células Caco-2 irradiadas por raios-X e PBMC. J. Vis. Exp. (2018)

Este vídeo demonstra a medição da resistência elétrica transepitelial em células Caco-2 irradiadas, tanto na presença quanto na ausência de células PBMC. Este método permite o estudo dos efeitos sinérgicos da radiação e das células imunes na barreira celular epitelial.

Protocolo

1. Configuração de irradiação

Nota: A irradiação de células Caco-2 foi realizada no departamento de radioterapia do Istituto di Ricovero e Cura a Carattere Scientifico (IRCCS) S. Maugeri (Pavia, Itália) com um acelerador linear usado rotineiramente para tratar diferentes tipos de câncer.

1. Defina a energia de raios-X do fóton para o pico de 6 MV. O acelerador linear opera em regime de pulsação (tempo entre dois pulsos consecutivos de aproximadamente 4 ms; duração de um único pulso de cerca de 5 μs com uma taxa de dose de até 1 × ^10-3 Gy/p).
2. Coloque as placas de 6 poços contend....

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
ThinCert 6 Well Cell Culture Inserts para placas multipoços	Greiner Bio-one	Nº 657610	equipamento
Placa Multipoços para Cultura de Células, 6 Poços	Greiner Bio-one	Nº 657160	plástico
Placa Multipoços para Cultura de Células, 24 Poços	Greiner Bio-one	Nº 662160	plástico
RPMI 1640 sem L-Glutamina	Lonza	12-167F	Reagentes
Voltímetro/ohímetro Millicell-ERS	Millipore	MERS 00001	equipamento