Fonte: Meunier, E., et al. Quantificação de Salmonella Citosólica vs. Vacuolar em Macrófagos Primários por Permeabilização Diferencial. J. Vis. Exp. (2015).
Este vídeo demonstra um ensaio para quantificar Salmonella typhimurium citosólica e vacuolar dentro de macrófagos derivados da medula óssea usando permeabilização diferencial. Os macrófagos são infectados com uma Salmonella que expressa proteína fluorescente, que é internalizada dentro de uma estrutura vacuolar especializada chamada vacúolo contendo Salmonella ou SCV. Um subconjunto de bactérias escapa do SCV e entra no citosol. A membrana plasmática rica em colesterol dos macrófagos é permeabilizada com digitonina, deixando o VCS intacto. Ao marcar as bactérias citosólicas com um anticorpo marcado com fluorescência, a porcentagem de bactérias vacuolares e citosólicas é quantificada usando classificação de células ativadas por fluorescência (FACS).
