Artigo de método

Um ensaio de base molecular para quantificar os vírus influenza A e B

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8 de julho de 2025

Neste artigo

Resumo

Fonte: Otto, C. C. et al., Detecção Molecular Rápida e Diferenciação dos Vírus Influenza A e B. J. Vis. Exp. (2017)

O vídeo demonstra um ensaio para quantificar os vírus influenza A e B. Este ensaio emprega amplificação de endonuclease de corte com primers específicos para influenza e detecção de alvos usando sondas de farol molecular.

Protocolo

Todos os procedimentos que envolvem coleta de amostras foram realizados de acordo com as diretrizes do IRB do instituto.

1. Antes de executar o ensaio

NOTA: O ensaio Influenza A e B é aprovado para amostras de swab nasofaríngeo e para swabs nasofaríngeos armazenados em meios de transporte viral. Os cotonetes estão incluídos no kit e devem ser usados para um desempenho ideal. No entanto, swabs nasais de rayon, espuma, flocados ou poliéster também podem ser usados para coletar amostras de swab nasal.

  1. Para coletar uma amostra de swab nasal, insira o swab na narina que tem a drenagem mais visível ou que está mais congestionada. Com uma rotação suave, empurre o cotonete para dentro da narina até encontrar resistência e gire várias vezes contra a parede nasal antes de removê-lo lentamente da narina. Armazene os swabs e transporte-os em frascos contendo 3 ml de meio de transporte viral (VTM).
    NOTA: Deve-se prestar muita atenção à coleta adequada de amostras, pois a coleta inadequada de amostras pode produzir resultados errôneos.
    NOTA: As amostras de swab devem ser testadas o mais rápido possível após a coleta. No entanto, podem ser conservados à temperatura ambiente até 2 horas ou refrigerados a 2-8 °C durante 24 horas se o ensaio não estiver imediatamente disponível. As amostras recém-coletadas são ideais para um desempenho ideal do teste. O manuseio, armazenamento e/ou transporte inadequados da amostra podem produzir resultados errôneos.
    NOTA: Como medida de precaução, os indivíduos que realizam este teste devem tratar todas as amostras como potencialmente infecciosas, seguindo as precauções universais ao manusear as amostras.
  2. Leve todas as amostras à temperatura ambiente antes do teste.
    NOTA: Todos os componentes de teste são para um único uso e não devem ser usados para realizar vários testes. Não misture componentes do kit de diferentes números de lote. Não use reagentes do kit após a data de validade.
  3. Leve o receptor de amostra azul à temperatura ambiente antes do teste. A base de teste laranja pode ser testada sem a necessidade de aquecer à temperatura ambiente.
  4. Deixe todas as peças de teste na embalagem de alumínio até imediatamente antes de usar. Ligue o instrumento pressionando o botão liga/desliga na lateral do instrumento. Digite o ID do usuário e pressione 'OK.

2. Executando o teste

  1. Para iniciar o processo de teste, toque em 'Executar teste' na tela do instrumento. Digite o ID do paciente usando o teclado na tela ou o leitor de código de barras e pressione 'OK'. Abra a tampa e insira a base de teste Orange no suporte da base de teste Orange.
  2. Confirme se o teste correto é exibido na tela e pressione 'OK'. Insira o receptor de amostra azul no suporte do receptor de amostra azul.
    NOTA: Não abra o sample receptor antes de colocá-lo no instrumento, pois isso impedirá que o tampão de eluição atinja a temperatura operacional correta e poderá afetar o desempenho do teste.
  3. Aguarde o sample receptor aquecer. Quando solicitado pelo instrumento, remova o lacre de alumínio e coloque o cotonete do paciente a ser testado no receptor de amostra.
    NOTA: Ao remover a folha, coloque dois dedos na borda do receptor de amostra para garantir que ele permaneça no lugar.
  4. Misture vigorosamente o cotonete no líquido por 10 segundos, pressionando a cabeça do cotonete contra a lateral do receptor de amostra enquanto o mistura para ajudar a desalojar a amostra do cotonete. Pressione 'OK' para prosseguir. Se os swabs de teste forem armazenados em um meio de transporte viral, vórtice o VTM por 10 segundos e adicione 200 μl ao receptor de amostra.
  5. Pressione o cartucho de transferência branco no receptor de amostra azul. Continue pressionando o sample receptor até que o indicador laranja suba.
  6. Levante e conecte o cartucho de transferência à base de teste. Observe o indicador laranja descer assim que a transferência do cartucho estiver conectada corretamente. Feche a tampa e não abra até que a mensagem "Teste concluído" apareça na tela.

3. Controle de qualidade (QC)

  1. Toque em 'Executar teste de controle de qualidade' na tela inicial. Selecione o teste de CQ a ser executado. Confirme o tipo de teste para corresponder à amostra de CQ destinada ao teste tocando em 'OK' e seguindo as instruções na tela para concluir o teste.

4. Interpretação dos resultados

  1. Após a conclusão do teste, observe os resultados do teste exibidos na tela com interpretações para a presença de Influenza A, B e subtipos desconhecidos. Para resultados inválidos, repita o teste.

5. Manutenção e Limpeza

  1. Limpe o instrumento e a área da bancada ao redor diariamente com etanol a 70% ou solução de alvejante a 10%. Pulverize a solução de limpeza em anúncioamp pano sem fiapos para limpar. Não despeje as soluções diretamente no instrumento.

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Divulgações

Não há conflitos de interesse declarados.

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo
NomeEmpresaNúmero de catálogoComentários
Alere i InstrumentAlereNAT-000 (Global), NAT-024 (EUA)
Kit de Teste Alere i Influenza A & B 24Alere425-000 (Global), 425-024 (EUA)
Scanner de código de barrasAlereEQ001001
Impressora Universal AlereAlere55115 (Global), alereiprinter (EUA)
Pipeta de precisão de 200 μL
Ponteiras de pipeta descartáveis de 200 μL
Meio de transporte viralRemelM4-RT

Reimpressões e permissões

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