Um método de preparação de amostras para visualizar bactérias formadoras de biofilme em hifas fúngicas

Resumo

Fonte: Guennoc, Cora Miquel, et al, Um novo método para análise qualitativa em várias escalas de biofilmes bacterianos em colônias de fungos filamentosos usando microscopia confocal e eletrônica. J. Vis. Exp. (2017).

Este vídeo descreve um método para cultivar e analisar qualitativamente biofilmes bacterianos em hifas fúngicas usando microscopia. Os biofilmes bacterianos freqüentemente se formam em superfícies fúngicas e envolvem vários processos de interação bactéria-fungo, como cooperação metabólica, competição ou predação.

Protocolo

1. Preparação de um biofilme in vitro de bactérias na colônia fúngica

1. Centrifugue a cultura bacteriana a 5.000 x g por 3 min e suspenda o pellet em 25 ml de tampão fosfato de potássio estéril 0,1 M (25 g / L KH₂PO₄ e 2,78 g / L K₂HPO₄, pH 5,8). Repita esta etapa uma vez e ajuste a concentração bacteriana final para 10⁹ células/ml com o mesmo tampão.
2. Encha uma microplaca de 6 poços com 5 ml da suspensão bacteriana (ou tampão estéril de fosfato de potássio 0,1 M para o controle negativo).
3. Corte a membrana de celofane da cultura fúngica com uma lâmina de barbe....

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Placas de cultura de tecidos Falcon de 6 poços	Fisher Científico	08-772-33	Usado em 2.2 & 3.1
Tinto Congo	Fisher Científico	C580-25	Utilizado em 3.1.4.1
Mancha de 1 célula FUN	Thermo Fisher Científico	Rolamento F7030	Utilizado em 3.1.4.1
Aglutinina de Gérmen de Trigo, Conjugado Alexa Fluor 633	Thermo Fisher Científico	W21404	Utilizado em 3.1.4.1
Solução DAPI	Thermo Fisher Científico	Nº 62248	Usado em 3.1.4.2
Iodeto de propídio	Thermo Fisher Científico	Pág. 3566	Utilizado em 3.1.4.3
FilmTracer SYPRO Rubi Biofilme Matrix Mancha de proteína	Thermo Fisher Científico	F10318	Usado em 3.1.4.4
Meio de montagem deslizante Fluoromount-G	Fisher Científico	OB100-01	Usado em 3.1.7
LSM780 Axio Observador Z1	Zeiss		Usado em 3.2.1
Software ZEN 2.1 lite preto	Zeiss		Usado em 3.2.1
Revestidor de alto vácuo Leica EM ACE600	Leica		Usado em 4
GêmeosSEM-FEG	Zeiss		Usado em 4