Todos os procedimentos envolvendo modelos animais foram revisados pelo comitê institucional local de cuidados com animais e pelo conselho de revisão veterinária JoVE.
1. Imagem PET in vivo com 89Zr-DFO-J591
CUIDADO: Esta etapa do protocolo envolve o manuseio e manipulação da radioatividade. Antes de realizar essas etapas, os pesquisadores devem consultar o Departamento de Segurança de Radiação de sua instituição de origem. Todas as medidas possíveis devem ser tomadas para minimizar a exposição à radiação ionizante.
- Em camundongos machos atímicos nus, implante subcutaneamente 5 x 106 células cancerígenas de carcinoma linfonodal da próstata (LNCaP) e permita que elas cresçam até um xenoenxerto de 100-150 mm3 (3-4 semanas após a inoculação).
- Diluir o radioimunoconjugado 89Zr-DFO-J591 até uma concentração de 1,0 mCi/ml em solução salina estéril a 0,9%.
- Injete 200 μl da solução 89Zr-DFO-J591 (DFO = desferroxamina, J591 = anticorpo direcionado ao antígeno de membrana específico da próstata [PSMA]) (200 μCi; 7,4 MBq) na veia da cauda lateral dos camundongos portadores de xenoenxerto.
- No momento de imagem desejado (por exemplo, 12, 24, 48, 72, 96 ou 120 horas após a injeção), anestesiar o camundongo com uma mistura de isoflurano a 2% e gás oxigênio.
- Coloque o mouse na cama do scanner PET de pequenos animais e mantenha a anestesia durante a varredura usando uma mistura de isoflurano a 1%. Antes de colocar o animal na cama do scanner, verifique a anestesia usando o método de pinça do dedo do pé e aplique pomada oftálmica nos olhos do camundongo para evitar o ressecamento durante a anestesia.
- Adquira os dados PET para o mouse por meio de uma varredura estática com um mínimo de 40 milhões de eventos coincidentes usando uma janela de energia de 350-700 keV e uma janela de tempo de coincidência de 6 nseg.
- Depois de concluir a aquisição da imagem, não deixe o mouse sozinho e não o coloque em uma gaiola com outros mouses até que ele recupere a consciência.
