Um ensaio in vitro para avaliar o efeito de anticorpos no biofilme de Candida tropicalis

Resumo

Fonte: Chandley, P., et al. Um ensaio de redução solúvel à base de tetrazólio para avaliar o efeito de anticorpos em biofilmes de Candida tropicalis. J. Vis. (2022).

Este vídeo demonstra uma técnica in vitro para estudar o efeito de anticorpos em biofilmes fúngicos. O fungo patogênico Candida tropicalis secreta um fator de virulência secretado pela aspartil proteinase 2 (Sap2), facilitando a formação de biofilme. Após a introdução de um soro inativado pelo calor contendo anticorpos específicos para Sap2 que inibem a maturação do biofilme, a viabilidade das células fúngicas é avaliada por meio de um ensaio cromogênico.

Protocolo

1. Formação de biofilme de C. tropicalis

1. Prepare biofilmes de Candida em uma placa de microtitulação de poliestireno de fundo plano de 96 poços, conforme descrito anteriormente (Figura 1).
2. Adicione 100 μL de cultura de C. tropicalis (de 10 6 células/mL de estoque, preparado como acima) a uma placa de microtitulação de 96 poços usando uma pipeta multicanal (Figura 2A). Manter as duas últimas colunas (11 e 12) como controlos negativos «sem fungos mais soro» e «sem fungos e sem soro», não adicionando células fúngicas. Preencha as colunas 11 e 1....

Resultados

Figura 1: Imagem do biofilme de Candida tropicalis.(A) Visualização do biofilme de Candida tropicalis formado no fundo de uma placa de microtitulação de 96 poços após a remoção do meio RPMI, usando um microscópio invertido. A imagem foi capturada por microscopia de campo claro (nenhuma coloração foi usada). (B) Visualização do biofilme de C. tro.......

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Tubos de centrífuga cônicos de 15 mL	Falcão BD	546021
1x PBS	-	Preparado em laboratório	NaCl : 4 g KCl : 0,1 g Na2HPO4: 0,72 g KH2PO4 : 0,12 g Água 500 mL. Ajuste o pH para 7,4
Tubos de centrífuga cônicos de 50 mL	Falcão BD	546041
Placas de microtitulação de 96 poços	Nunc	442404
incubadora	genérico
Menadione	sigma	M5625
Leitor de placas de microtitulação	genérico
Pipeta multicanal e ponteiras	genérico
Placas de Petri	Tarson	Nº 460090
Ringers Lactato	-	Preparado em laboratório	cloreto de sódio 0,6 g lactato de sódio 0,312 g cloreto de potássio 0,035 g cloreto de cálcio 0,027 g Água 100 mL. Ajuste para pH 7,0
RPMI 1640 MOPS	Himídia	AT180
XTT	Invitrogen	X6493