Artigo de método

Uma técnica de cromatografia de afinidade para a purificação de anticorpos monoclonais

8 de julho de 2025

Neste artigo

Resumo

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Fonte: Elgundi, Z., et al. Produção em escala laboratorial e purificação de um anticorpo terapêutico. J. Vis. Exp. (2017).

Este vídeo demonstra uma técnica para purificar anticorpos monoclonais do sobrenadante de cultura obtido de uma cultura de células produtoras de anticorpos. O processo envolve o uso de uma matriz de grânulos de agarose reticulados com proteína A conjugada, que imobiliza os anticorpos no sobrenadante nos grânulos, permitindo uma separação eficaz dos contaminantes. Ao aplicar um tampão de eluição com pH baixo, a interação proteína-anticorpo A é afrouxada, facilitando a coleta de frações contendo anticorpos.

Protocolo

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1. Purificação de anticorpos por cromatografia de afinidade usando um sistema automatizado de cromatografia líquida de proteína rápida (FPLC)

NOTA: O procedimento a seguir geralmente pode ser aplicado à maioria dos sistemas automatizados. A purificação pode ser realizada à temperatura ambiente ou a 4 °C (se o sistema FPLC for mantido em uma sala fria). Uma série de testes de reconhecimento pode ser realizada para identificar as condições ideais de purificação, incluindo matriz de coluna apropriada, tampão de ligação, tampão de eluição e pH para garantir a recuperação máxima do anticorpo purificado do meio con....

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Divulgações

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Não há conflitos de interesse declarados.

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo
NomeEmpresaNúmero de catálogoComentários
Comprimidos de solução salina tamponada com fosfato (PBS), pH 7,4, 100 ml09-2051-100Astral Científico
HiTrap Protein A High Performance, 1 coluna de 5 mlGE17-0403-01Sigma-Aldrich
AKTApurificador 10028406266GE SaúdeSistema FPLC automatizado, que pode incluir uma bomba de amostra P-960 e um coletor de frações Frac-920.
Glicina-HClG2879Sigma-Aldrich
Ácido cítrico, monohidratadoBIOC2123Astral Científico
Citrato de sódio, sal trissódico di-hidratadoBIOCB0035Astral Científico
Solução de Tris-HCl 1 M pH 9,0BIOSD8146Astral Científico
Filtros ultracentrífugos Amicon (30 MWCO)UFC803008/UFC903008Merck MilliporeUsado para tamponar a troca e concentrar a proteína purificada.
Kit de ensaio de ácido bicinconínico (BCA) Pierce23227Thermo Fisher Científico
Sistema BLItz45-5000fortéBIOInstrumento usado para medições de interferometria de biocamada (BLI).
Biossensores de proteína A18-5010fortéBIO

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