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Uma tecnologia de microarray de peptídeos para perfis de especificidade de anticorpos

July 8th, 2025

In This Article

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Fonte: Cornett, E. M., et al. Análise da especificidade do anticorpo histona com microarrays de peptídeos. J. Vis. Exp. (2017).

Este vídeo demonstra uma técnica que aplica a tecnologia de microarray de peptídeos para traçar o perfil da especificidade dos anticorpos que reconhecem modificações pós-traducionais (PTMs) em peptídeos de histonas. Uma lâmina de microarray contendo peptídeos de histonas conjugados com fluoróforo imobilizado com combinações conhecidas de PTM é tratada com anticorpos específicos de PTM alvo. Esse processo ajuda a identificar a especificidade do anticorpo para o alvo e sua potencial reatividade cruzada com PTMs não-alvo.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. Projetando o layout do slide da matriz e da placa de origem

  1. No cabeçalho 'Planejar um layout de slide' na interface do ArrayNinja, clique no link que corresponde à impressora de microarray que está sendo usada.
    nota: O ArrayNinja foi programado para imitar o movimento robótico de duas impressoras de microarray comumente usadas (consulte a Tabela 1). A compatibilidade com os outros arrayers pode ser configurada mediante solicitação.
  2. Clique dentro da caixa de diálogo 'Placa de carregamento', digite "vazio" e clique em 'enter'. Consulte a Figura 1 para obter uma captura de t....

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Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

figure-results-1
Figura 1: Módulo de design do ArrayNinja. Uma captura de tela do módulo de design ArrayNinja é mostrada na linha pontilhada. O painel de controle (superior) mostra todos os parâmetros que podem ser alterados na impressora de microarray. À medida que esses parâmetros são ajustados, a imagem de desenho animado do layout do slide (canto inferior esquerdo) é atualizada em tempo real. Depois que o layout .......

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Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
Não há conflitos de interesse declarados.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
Buffer de impressãoArrayItPpb
BsaOnipuro2390
Lâminas de microscópio de vidro revestidas com estreptavidinaGreiner Bio-oneRolamento 439003-25
placa de polipropileno com 384 poçosGreiner Bio-one784201
Biotina-fluoresceínasigmaRolamento 53608
impressora de microarray de contatoAushon2470Impressora Aushon 2470 Microarray
impressora de microarray de contatoMáquinas GenéticasOmniGrid 100Impressora OmniGrid Microarray
PbsInvitrogen14190
Buffer de bloqueioArrayItSBB
Caneta de cera hidrofóbicaLaboratórios de vetoresH-4000Caneta PAP de barreira hidrofóbica ImmEdge
Junta de siliconeGrace Bio-labs622511
Vaso de hibridizaçãoThermo Científico267061ou embarcação similar
Anticorpo secundário conjugado com corante fluorescenteTecnologias da VidaA-21244Alexa Fluor 647 (anti-coelho)
Anticorpo secundário conjugado com corante fluorescenteTecnologias da VidaA-21235Alexa Fluor 647 (anti-mouse)
Impressão de ceraArrayItMSI48
Interpolação-20OnipuroRolamento 9490
Scanner de microarrayInnopsysInnoScan 1100ALou scanner de microarray equivalente
Microarray do peptide da histona de EipTitanEpicypher112001
Microarray de peptídeos de histona AbSurance ProMilliporeRolamento 16668
Matriz de peptídeos de histonas MODificadaMotivo ativo13001
Microarrays do peptide do código da histonaJPTHis_MA_01
ceraCarvalho RealCera do Golfopara impressão de cera
Câmara de hibridização de slides de microarray umidificadoVWRRolamento 97000-284
Câmara de lavagem de lâminas de microscópio de alto rendimentoArrayItHTW
Centrífuga de lâminas de microscópioVWR93000-204
Anticorpo 1AbcamNº 8898
Anticorpo 2MilliporeRolamento 07-473
Peptídeo de histona biotiniladoEpiCypher12-2001Exemplo de peptídeo. Peptídeos semelhantes com várias modificações estão disponíveis em várias fontes comerciais.
ImageMagickhttps://www.imagemagick.org/script/index.php
ArrayNinjahttps://rothbartlab.vai.org/tools/

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Peptide MicroarrayAntibody SpecificityHistone PeptidesPost Translational ModificationsFluorescence DetectionMicroarray ScannerHybridization BufferSecondary AntibodiesBlocking BufferWax Imprinter

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