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Artigo de método

Análise baseada em citometria de fluxo da ativação de células dendríticas usando complexos imunes

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8 de julho de 2025

Neste artigo

Resumo

Fonte: Santana-Magal, N., et al. Protocolo de isolamento de células dendríticas derivadas de monócitos de camundongo e sua subsequente ativação in vitro com complexos imunes tumorais.J. Vis. Exp. (2018)

Este vídeo demonstra um protocolo para avaliar a ativação de células dendríticas usando células tumorais revestidas com imunoglobulina G (IgG). As células dendríticas internalizam as células tumorais revestidas com IgG, processam os antígenos tumorais e os apresentam na superfície por meio de moléculas de MHC-II, juntamente com a co-expressão da molécula coestimulatória CD86. Essas células dendríticas são submetidas a imunocoloração direcionada a MHC-II e CD86 e análise de citometria de fluxo para identificar seu estado de ativação.

Protocolo

Todos os procedimentos que envolvem coleta de amostras foram realizados de acordo com as diretrizes do IRB do instituto.

1. Isolamento de células dendríticas derivadas de monócitos associadas a tumores

  1. Em uma capela de fluxo laminar, remova os tumores de camundongos sacrificados com CO2 e coloque os tumores em meio RPMI sem soro fetal bovino (FBS).
    nota: Raspar os camundongos e borrifá-los com etanol a 70% antes de remover os tumores é altamente recomendado para minimizar possíveis contaminações do pelo. Certifique-se de que o tumor não exceda 25 - 40 mm2, pois tumo....

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Divulgações

Não há conflitos de interesse declarados.

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo
NomeEmpresaNúmero de catálogoComentários
Ficoll-Paque PREMIUMGE-Saúde17-5442-02
OptiPrepTecnologias de células-troncoNº 7820
Microesferas CD45Miltenyi130-052-301
Kit de isolamento de monócitos EasySepTecnologias de células-troncoRolamento 19861
Colagenase IVsigmaC9697-50MGTeste cada lote para endotoxina
DNase IsigmaDN25-10MG
HBSSThermoFisher14025092
FBSThermoFisher16140071Teste cada lote para endotoxina
PE-CD11cBiolenda117307
APC-CD11bBiolenda101211
Violeta Brilhante 650 MHCIIBiolenda107641
AF48- CD86Biolenda105017
APC/Cy7-Ly-C6Biolenda108423
PE/Cy7-CD15Biolenda135523

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