O efeito da aspirina e do ibuprofeno na capacidade fagocítica dos macrófagos

Resumo

Este vídeo mostra um método para avaliar o impacto da aspirina e do ibuprofeno, em suas concentrações inibitórias mínimas, na fagocitose de macrófagos usando células fúngicas coradas com corante fluorescente sensível ao pH. As drogas inibem a ciclooxigenase-2, diminuindo a formação de prostaglandinas e aumentando a fagocitose de macrófagos, conforme observado por meio de medições de fluorescência de corantes sensíveis ao pH.

Protocolo

1. Considerações de segurança

1. O pessoal deve usar equipamento de proteção individual (EPI).
2. Manuseie o patógeno e os macrófagos em um gabinete de segurança biológica Classe II.

2. Preparação de macrófagos

1. Cultive uma linhagem celular de macrófagos murinos, RAW 264.7, em um frasco de tecido contendo 10 mL de meio Roswell Park Memorial Institute-1640 (RPMI-1640), suplementado com 20 mg / mL de estreptomicina, 2 mM de L-glutamina, 20 U / mL de penicilina e 10% de soro fetal bovino (FBS).
2. Colocar o balão numa incubadora de dióxido de carbono (CO₂) a ....

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Ágar	Merck		Usado para preparar placas YM
Extrato de levedura	Merck		Usado para preparar placas YM
Extrato de malte	Merck		Usado para preparar placas YM
Peptona	Merck		Usado para preparar placas YM
Base de nitrogênio de levedura (YNB)	Laboratórios Difco		Usado no cultivo de células criptocócicas
glicose	Merck		Usado para preparar placas YM
Mancha azul de tripano	Sigma-Aldrich		Para enumerar células vivas e mortas
Tampão fosfato	Sigma-Aldrich		Lave e dilua as células
RPMI- 1640 médio	Biocromo		Meios de cultivo para macrófagos
Soro fetal bovino (FBS)	Biocromo		Usado para complementar o meio RPMI-1640
Penicilina/estreptomicina/L-glutamina	Sigma-Aldrich		Adicionado ao meio RPMI-1640
pHrodo verde zymosan A mancha	Tecnologias da Vida		Usado para corar células internalizadas devido a uma mudança no pH
Ácido acetilsalicílico (aspirina)	Sigma-Aldrich		A droga que deve ser testada
Etanol absoluto	Merk		Usado para dissolver a aspirina
ibuprofeno	Sigma-Aldrich		Medicamento a ser testado
Dimetilsulfóxido (DMSO)	Merk		Usado para dissolver o ibuprofeno
Placas de microtitulação de fundo plano de 96 poços	Greiner Bio-One		Usado como um recipiente dentro do qual as reações foram realizadas
Balão de tecido	Lasec		Usado para cultivar macrófagos
Tubo de centrífuga de 15 mL	Lasec		Usado para conter macrófagos
Raspador de células	Lasec		Usado para separar macrófagos do frasco de tecido
Circuito de inoculação	Lasec		Usado para listrar a cultura na placa de ágar
Hemocitômetro	Marienfield		Para determinar a concentração celular dos macrófagos
Tubos de plástico de 1,5 mL	Merck		Usado como um recipiente dentro do qual as reações foram realizadas
Espectrofotômetro de pesquisa EZ Read 800	Biocromo		Para ler a densidade óptica
Fluoroskan Ascent FL	Termo-Científico		Para medir a fluorescência
Incubadora de CO2	Thermo-Fisher		Usado para incubar os macrófagos
Cabine de segurança biológica classe II	ESCO		Para trabalhar com segurança com os patógenos sem causar danos ao usuário.