Detecção Bacteriana Quantitativa Multiplexada usando Microesferas Magnéticas Marcadas com Corante

Abstract

Este vídeo demonstra a detecção bacteriana quantitativa multiplexada empregando microesferas de poliestireno magnético carboxilado tingidas em conjuntos distintos. O procedimento engloba a formação de complexos de bactérias, separação magnética e análise baseada em fluxo, permitindo a quantificação precisa e simultânea de várias bactérias no mesmo poço de reação.

Protocol

1. Acoplamento covalente de anticorpos de captura a microesferas MagPlex

Cada anticorpo de captura é conjugado a um conjunto específico de microesferas magnéticas carboxiladas usando um procedimento de duas etapas, conforme descrito abaixo.

NOTA: Um kit de acoplamento incluindo todos os reagentes, tampões e materiais necessários para o acoplamento de microesferas também está disponível (consulte TABELA DE MATERIAIS).

1. Ressuspenda a suspensão de microesferas desacoplada de acordo com as instruções descritas na folha de informações do produto fornecida ....

Results

Figura 1: Fluxo de trabalho de imunoensaio sanduíche de captura multiplexada. Uma mistura multiplexada de microesferas acopladas a anticorpos é dispensada em cada poço e a amostra é adicionada. Após incubação por 1 hora, as reações são lavadas e os anticorpos de detecção biotinilados são adicionados. Após uma incubação de 1 hora, as reações são lavadas novamente e o repórter SAPE é a.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Microesferas MagPlex®	Luminex®	MC100xx-YY	Consulte o site para números de catálogo individuais (https://www.luminexcorp.com/magplex-microspheres/#order)
Tubos de microcentrífuga de 1,5 mL	Eppendorf™	22431081	LoBind® de proteína
0,1 M fosfato de sódio monobásico (NaH2PO4), pH 6,2	MilliporeSigma	S3139	Buffer de ativação
Cloridrato de 1-etil-3-[3-dimetilaminopropil]carbodiimida (EDC)	Thermo Científico™	Perfurar™ 77149
N-hidroxisulfosuccinimida (Sulfo-NHS)	Thermo Científico ™	Perfurar™ 24510
Solução salina tamponada com fosfato (PBS), pH 7,4	MilliporeSigma	Pág. 3813	Amortecedor de acoplamento
Kit de acoplamento de anticorpos xMAP®	Luminex®	Telefone: 40-50016	Kit opcional disponível para acoplamento de microesferas.
Anticorpo anti-Escherichia coli O157:H7	SeraCare	Rolamento 5310-0326	Policlonal, usado para captura e detecção
Anticorpo anti-Salmonella CSA-Plus	SeraCare	Rolamento 5310-0321	Policlonal, usado para captura e detecção
Anticorpo anti-Campylobacter spp.	SeraCare	Rolamento 5310-0324	Policlonal, usado para captura e detecção
Anticorpo anti-Listeria	SeraCare	Rolamento 5310-0319	Policlonal, específico do gênero, usado para captura e detecção
PBS, pH 7,4 contendo 0,02% de Tween-20, 0,1% de BSA, 0,05% de azida de sódio (PBS-TBN)	MilliporeSigma	P3563 A7888 S8032	Pode ser usado até 1% de BSA
Anticorpo anti-Escherichia coli O157:H7	SeraCare	Rolamento 5310-0326	Policlonal
(EZ-Link Sulfo-NHS-LC-Biotina) (Perfuração).	Thermo Científico™	Rolamento A39257
E. coli O157:H7	SeraCare	Rolamento 5370-0013	Morto pelo calor
Salmonella sorotipo Typhimurium	SeraCare	Rolamento 5370-0002	Morto pelo calor
Campylobacter jejuni	SeraCare	Rolamento 5370-0011	Morto pelo calor
Listeria monocytogenes	SeraCare	Rolamento 5370-0010	Morto pelo calor
Estreptavidina, Conjugado R-Ficoeritrina (SAPE)	Thermo Científico™	S866