Um ensaio para medir o acúmulo de uma sonda antibiótica fluorescente em células bacterianas

Neste artigo

Resumo

Fonte: Stone, M. R. L., et al. Visualização da resistência bacteriana usando sondas antibióticas fluorescentes. J. Vis. Exp. (2020).

Este vídeo demonstra um ensaio para medir o acúmulo de uma sonda antibiótica fluorescente em células bacterianas. A exposição a um inibidor da bomba de efluxo interrompe o gradiente de prótons transmembrana nas células bacterianas, sobre o qual um antibiótico conjugado com fluoróforo é adicionado. A inibição das bombas de efluxo devido ao gradiente de prótons interrompido causa acúmulo do antibiótico dentro da bactéria. As células bacterianas são lisadas e a intensidade da fluorescência é medida para confirmar o acúmulo de antibióticos.

Protocolo

1. Avaliação da atividade antimicrobiana

NOTA: Todo o trabalho envolvendo bactérias deve ser realizado em condições estéreis para evitar a contaminação do ensaio ou do laboratório. Todos os meios devem ser autoclavados antes do uso, e os utensílios de plástico e equipamentos, como pipetas, devem ser mantidos estéreis. Recomenda-se que o trabalho seja feito em uma capela de biocontenção (tipo 2).

Listre os estoques de glicerol de cepas bacterianas apropriadas para o andaime antibiótico em ágar caldo de lisogenia (LB, preparado de acordo com as instruções do fabricante) e cresça durante a noite a ....

Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.

Resultados

Tabela 1. Atividades antibióticas de sondas antibióticas fluorescentes baseadas em ciprofloxacina, trimetoprima e linezolida contra cepas bacterianas clinicamente relevantes apropriadas, conforme medido por ensaios de microdiluição em caldo MIC Na maioria dos casos, as sondas perderam alguma atividade em comparação com o medicamento original, mas mantiveram alguma potência antibiótica mensurável (suficiente para ser útil em estudos posteriores).