Purificação de nanopartículas de proteínas automontáveis usando cromatografia de afinidade

Abstract

Fonte: Karch, C. P. et al., Produção de nanopartículas de proteína de automontagem expressas em E. coli para vacinas que requerem apresentação de epítopo trimérico.J. Vis. Exp. (2019)

Este vídeo mostra a purificação de nanopartículas de proteínas automontadas marcadas com histidina ou SAPNs usando cromatografia líquida de afinidade. As frações SAPN purificadas resultantes são adequadas para o desenvolvimento de vacinas, prometendo potenciais aplicações imunoterapêuticas.

Protocol

1. Expressão do núcleo de nanopartículas de proteína auto-montável contendo uma proteína de feixe de seis hélices (SHB-SAPN) em E. coli BL21(DE3)

1. Misture 95 mL do componente A e 5 mL do componente B do meio em um frasco Erlenmeyer de vidro estéril de 2 L de acordo com as instruções do fabricante (consulte a Tabela de Materiais). Adicione ampicilina a uma concentração final de 100 μg / mL.
2. Inocule o meio com E. coli de uma cultura de estoque de glicerol previamente estabelecida. Incubar a cultura a 30 °C com agitação a 200 rotações por minuto (rpm) por 48 h.
   NOTA: O estoqu....

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
2-propanol	pescador	BP26181	4 L
ampicilina	pescador	BP1760-25	25 gramas
Filtro de vácuo descartável Corning / sistemas de armazenamento	pescador	09-761-108	Uma variedade de tamanhos
Colunas Pré-embaladas HisTrap HP de 5 mL da GE Healthcare	GE HealthCare	Telefone: 45-000-325	Pacote de 5
Glicerol	pescador	BP229-4	4 L
Imidazol	pescador	O3196-500	500 gramas
Meio de Expressão de E. coli Magic Media	ThermoFisher	K6803	1 L
Seringa Estéril MilliporeSigma Millex 0.22 mm Filtros	Millipore	SLGV033RB	Pacote de 250
One Shot BL21 Star (DE3) E. coli quimicamente competente	ThermoFisher	C601003	20 frascos
Fosfato de Sódio Monobásico	pescador	BP329-500	500 gramas
Base Tris	pescador	BP152-1	1 kg
ureia	pescador	BP169-500	2,5 kg
equipamento
Rotor de Ângulo Fixo Fiberlite F14-14 x 50cy	ThermoFisher	Telefone: 096-145075	Rotor
Sistema de cromatografia NGC Quest 10	BioRad	7880001	FPLC para auxiliar na purificação de proteínas
Sonifer 450	Branson	Também conhecido como 096-145075	Soniador