Imunoterapia

Este vídeo ilustra um método para isolar células T natural killer invariantes, também conhecidas como células iNKT. O procedimento começa com a injeção de um glicolipídio sintético em um camundongo para estimular a ativação e proliferação de células iNKT no baço. Posteriormente, suspensões unicelulares são preparadas a partir do baço e incubadas com complexos de reconhecimento de células iNKT marcados com fluoróforos, seguidos de separação baseada em esferas magnéticas, para isolar as células...

Este vídeo demonstra uma técnica para fabricar células T do receptor de antígeno quimérico (CAR) ex vivo. As células T humanas são incubadas com esferas magnéticas revestidas com anticorpos anti-CD3 e anti-CD28, juntamente com um meio suplementado com interleucina-2 (IL-2), levando à ativação e proliferação de células T. Vetores lentivirais transgênicos são introduzidos, permitindo que o RNA transgênico se integre ao genoma do hospedeiro e expresse o transgene. Isso resulta nas células T...

Este vídeo demonstra um ensaio para transdução viral mediada por polímero catiônico em células natural killer (NK). As células são incubadas com vetores de lentivírus transgênicos que codificam uma proteína fluorescente. A adição de um polímero catiônico permite que o vírus se ligue às células e integre seu RNA ao genoma do hospedeiro, expressando a proteína fluorescente. A fluorescência é quantificada para avaliar o aumento da transdução induzido pelo polímero.

Este vídeo demonstra o processo de transfecção de macrófagos primários com mRNA modificado que codifica a proteína fluorescente verde. Esses mRNAs modificados, projetados para reduzir a imunogenicidade e melhorar sua estabilidade, garantem a transfecção bem-sucedida e a subsequente expressão de proteínas fluorescentes verdes, o que é confirmado por meio de microscopia de fluorescência.

Este vídeo demonstra uma técnica para remover seletivamente células específicas de uma cultura de células 3D mista por meio de fotoimunoterapia de infravermelho próximo. Neste método, as células-alvo são identificadas com precisão usando um anticorpo conjugado com um fotoabsorvedor NIR. A irradiação subsequente com luz infravermelha induz a morte celular, eliminando efetivamente as células-alvo da cultura 3D.

Este vídeo demonstra uma pequena técnica baseada em RNA interferente (siRNA) para interferir no fluxo autofágico. Um siRNA direcionado ao mRNA de FIP200 é introduzido em células dendríticas imaturas derivadas de monócitos (iDCs) usando eletroporação, causando o knockdown da expressão de FIP200 e levando à inibição da ruptura da lâmina nuclear por autofagia. Ao adicionar o vírus herpes simplex (HSV), a saída nuclear da progênie viral é inibida devido à ausência de ruptura da lâmina via fluxo...

O vídeo demonstra um ensaio usando células-tronco pluripotentes induzidas por humanos (iPSC) Essas células T, projetadas com receptores específicos do HBV, são transferidas para camundongos transgênicos. Os plasmídeos do genoma do HBV competentes para replicação são então injetados diretamente no fígado, permitindo a captação do DNA viral. Uma vez que os antígenos virais são expressos e apresentados por moléculas híbridas de MHC-I, as células T modificadas reconhecem e se ligam a esses...

Este vídeo demonstra uma técnica para a geração ex vivo de células T do receptor de antígeno quimérico (CAR) específico do antígeno tumoral. Vetores retrovirais portadores de RNA transgênico são misturados com células do baço em um meio suplementado com interleucina-2 para promover a sobrevivência e proliferação de células T. A mistura é então transferida para uma placa revestida com fragmentos de fibronectina humana recombinante e centrifugada para facilitar a fusão do vírus com a célula,...

O vídeo descreve um processo para criar células CAR T geneticamente modificadas por meio do Sistema CRISPR-Cas9. Infectar células T com lentivírus CRISPR e CAR resulta em modificações no gene alvo e na síntese de um receptor de antígeno quimérico ou CAR, levando à formação de células T CAR geneticamente modificadas.

Este vídeo demonstra um ensaio para realizar a edição de genes em células T humanas usando a tecnologia CRISPR-Cas9. Uma mistura de células T CD4+ e CD8+ primárias é combinada com um complexo ribonucleoproteico CRISPR-Cas9, visando genes específicos para nocaute. Após a eletroporação, o sgRNA guia Cas9 para a sequência de DNA alvo, criando cortes precisos. Esses cortes são então reparados pelo mecanismo de junção final não homólogo da célula, levando ao nocaute do gene.

Este vídeo demonstra uma técnica para modificação genética mediada por ribonucleoproteína Cas9 de células assassinas naturais primárias (NK). Uma ribonucleoproteína Cas9, consistindo de uma endonuclease Cas9 ligada a um RNA guia (gRNA) formado pelo emparelhamento de bases de um RNA CRISPR (crRNA) e um crRNA transativador (tracrRNA), é introduzido em células assassinas naturais primárias por meio de eletroporação. A ribonucleoproteína tem como alvo e cliva o DNA do hospedeiro no local alvo,...

Este vídeo demonstra um ensaio in vitro avaliando os efeitos citotóxicos das células T CAR em esferoides tumorais 3D que expressam proteínas fluorescentes. Esta avaliação utiliza a sonda fluorescente vermelha Anexina V, que se liga a resíduos de fosfatidilserina expostos no folheto externo de células cancerígenas apoptóticas após interações com células T CAR. A fluorescência vermelha emitida pela sonda ajuda a distinguir essas células das saudáveis que emitem fluorescência verde.

Este vídeo demonstra um método para estabelecer uma co-cultura tridimensional de esferóides tumorais e células T. Um molde de agarose com micropoços contendo esferóides tumorais é preparado, seguido pela adição de células T. Após a incubação, essa configuração permite estudar a interação das células T com os esferoides tumorais em um ambiente tridimensional controlado.

Este vídeo demonstra um ensaio in vitro para validar a atividade das células T do receptor de antígeno quimérico (CAR). As células do linfoma de células B que expressam o antígeno CD19 e a luciferase citoplasmática são co-cultivadas com células T CAR específicas para CD19. A ligação do CAR ao CD19 em um tumor induz as células T CAR a liberar citocinas e toxinas que causam citotoxicidade das células tumorais. A atividade das células T CAR é avaliada pela quantificação da citocina liberada e...

Este vídeo demonstra a realização de um ensaio de liberação de lactato desidrogenase para determinar a citotoxicidade das células natural killer (NK) contra as células cancerígenas alvo. O ensaio quantifica a liberação da enzima lactato desidrogenase citoplasmática das células cancerígenas, medindo a absorbância do produto de cor vermelha formado.

Este vídeo demonstra uma técnica para gerar células T do receptor de antígeno quimérico (CAR) específico do antígeno por meio de transdução retroviral. As células T CD8+ murinas ativadas são adicionadas a uma placa de micropoços revestida com fragmentos de fibronectina recombinante. Vetores retrovirais contendo RNA transgênico que codifica um receptor de antígeno quimérico específico do antígeno (CAR) são então introduzidos e a placa é centrifugada para facilitar a transdução. Após a incubação,...

Este vídeo demonstra um método para gerar vesículas de membrana plasmática a partir de células-tronco da medula óssea, passando-as rapidamente por um filtro de membrana. Esses PMVs mostram potencial para terapia de reposição citoplasmática.

Este vídeo demonstra um ensaio para gerar neutrófilos associados a tumores (TANs) antiangiogênicos. Ao tomar um tumor de melanoma murino contendo TANs pró-angiogênicos, as células individuais são isoladas usando classificação de células ativadas por fluorescência (FACS) e tratadas com um inibidor da nicotinamida fosforibosil transferase (NAMPT) para reduzir a capacidade de estimular a angiogênese.

Este vídeo demonstra um ensaio in vitro utilizando β-glucanos para ativar células microgliais para a produção de radicais superóxido, uma espécie reativa de oxigênio. Nas células cancerígenas cerebrais, os oxidantes reativos gerados suprimem ativamente a proliferação de células tumorais e induzem a morte celular.

Este vídeo demonstra um procedimento para a transferência adotiva de células dendríticas (DCs) apresentadoras de antígenos tratadas com alto teor de sal para camundongos. As células dendríticas (DCs) CD11c+ murinas são expostas a um meio contendo grandes quantidades de sódio, formando adutos da proteína isolevuglandina (IsoLG) nas células. Esses adutos servem como neoantígenos e são apresentados na superfície das DCs. As células tratadas com alto teor de sal são injetadas em camundongos por...

Este vídeo demonstra um ensaio para gerar células-tronco pluripotentes induzidas por antígeno tumoral (iPSC) derivadas de células-tronco pluripotentes (iPSC) derivadas de células T CD8αβ+. As iPSCs específicas do antígeno tumoral são cultivadas em uma monocamada de células estromais e diferenciadas em células progenitoras hematopoiéticas (HPCs). Os HPCs são diferenciados em células T CD4 + CD8 + duplamente positivas usando um meio de diferenciação. Essas células são então estimuladas a gerar...

Este vídeo demonstra uma técnica de fotoimunoterapia de infravermelho próximo para tratar o câncer de pulmão em um modelo de camundongo projetado exibindo células tumorais que expressam luciferase. Ao injetar um conjugado anticorpo-fotossensibilizador (APC) que se liga a antígenos específicos nas células tumorais, o camundongo é exposto à radiação infravermelha próxima, induzindo alterações fotoquímicas no APC e levando à morte necrótica das células tumorais ligadas. A eficácia do tratamento é...

Este vídeo demonstra uma técnica para gerar camundongos do sistema imunológico humano (HIS). As células-tronco hematopoiéticas CD34+ (HSCs) são isoladas de células do revestimento leucocitário do sangue do cordão umbilical humano usando esferas magnéticas revestidas com anticorpos. As HSCs CD34+ são expandidas em meio de crescimento enriquecido com citocinas e criopreservadas. Finalmente, os HSCs descongelados são injetados em um filhote de camundongo imunodeficiente para estabelecer o modelo...

Este vídeo ilustra o teste de terapia adjuvante ou adicional em um modelo de camundongo com tumores subcutâneos ressecados de forma incompleta. O camundongo parcialmente ressecado pelo tumor é tratado com um anticorpo direcionado à proteína anticitotóxica das células T reguladoras, reduzindo potencialmente o crescimento do tumor e sugerindo terapia adjuvante eficaz.

Este vídeo demonstra um ensaio para avaliar a eficácia da terapia antirretroviral oral combinada (cART oral) em um modelo de camundongo humanizado infectado pelo vírus da imunodeficiência humana-1 (HIV-1). Uma combinação de medicamentos direcionados ao HIV-1, incluindo inibidores da transcriptase reversa de nucleosídeos e inibidores de transferência de fita integrase, é administrada junto com um suplemento nutricional e antibióticos. Após o consumo dessa mistura pelos camundongos humanizados...

Este vídeo demonstra um método para enxertar pele humana em um camundongo imunodeficiente com uma resposta de neutrófilos suprimida. O método envolve a aplicação de pele humana de espessura dividida no leito do enxerto do camundongo, selando-o e cobrindo-o para recuperação. Eventualmente, a pele humana adere à pele do camundongo, estabelecendo vascularização e circulação, resultando em um xenoenxerto cutâneo bem-sucedido.

Este vídeo demonstra um ensaio para gerar um modelo de camundongo xenoenxerto humanizado. Um camundongo imunocomprometido é injetado com ciclofosfamida para causar depleção de células imunológicas. Células tumorais derivadas de pacientes misturadas com células mononucleares do sangue periférico humano (PBMCs) em um hidrogel são injetadas por via subcutânea no camundongo, formando um tumor com células T infiltrantes.

Este vídeo apresenta um procedimento para implante de cânula intracraniana em um modelo de camundongo com tumor cerebral, para facilitar a administração de um agente imunoterapêutico. A entrega de células T receptoras de antígeno quimérico específicas do glipicano-2 no microambiente tumoral desencadeia a ativação das células T, resultando em lise tumoral e regressão tumoral.

O vídeo demonstra a entrega locorregional de vírus oncolíticos por meio de injeção arterial hepática como abordagem terapêutica para carcinoma hepatocelular. Esses vírus se replicam seletivamente em células tumorais, induzindo lise celular e liberando antígenos associados a células tumorais. Esse processo desencadeia a morte celular imunogênica, induzindo uma resposta antitumoral.

Este vídeo demonstra uma técnica para avaliar a atividade antitumoral da proteína ativadora de neutrófilos Helicobacter pylori, ou HP-NAP, em um modelo de câncer de bexiga de camundongo. O HP-NAP interage com neutrófilos de células tumorais para produzir citocinas pró-inflamatórias, induzindo a diferenciação de células T virgens em fenótipos de células T auxiliares tipo 1 (Th1) e citotóxicas tipo 1 (Tc1). As células Th1 e Tc1 secretam interferon-gama, inibindo a angiogênese tumoral e promovendo...

Este vídeo mostra uma terapia baseada em células para artrite autoimune em camundongos. As células T reguladoras derivadas de iPSC que expressam receptores específicos de ovalbumina são injetadas com albumina de soro bovino metilado (mBSA) emulsionada em um adjuvante. As células apresentadoras de antígenos murinos (APCs) processam e apresentam o mBSA às células T, estimulando a ativação e migração das células T para a membrana sinovial da articulação do joelho. As injeções subsequentes envolvem...

Este vídeo demonstra uma técnica de injeção estereotáxica para administrar linfócitos T efetores humanos em um modelo murino portador de um tumor cerebral humano. Ao posicionar um camundongo anestesiado com tumor em uma estrutura estereotáxica e criar um orifício de rebarba no local da injeção no crânio, os linfócitos T efetores são injetados no local do tumor.

Este vídeo demonstra o método para gerar um camundongo BLT ósseo humanizado duplo (medula, fígado e timo) com um sistema imunológico humano funcional e um microbioma intestinal humano enxertado estável.

Este vídeo demonstra a geração de aerossóis de drogas e a entrega direcionada desses aerossóis apenas para camundongos usando uma unidade de inalação equipada com um gerador de aerossol. O camundongo é contido em um limitador apenas de nariz e conectado à unidade de inalação, que administra a droga diretamente na cavidade nasal do camundongo. Posteriormente, a droga passa pela traqueia e entra nos pulmões.

Este vídeo demonstra um método para gerar um modelo de interposição aórtica de camundongo para estudar a rejeição vascular induzida por aloimunidade. Depois de colocar um camundongo doador anestesiado em decúbito dorsal, a aorta abdominal infrarrenal (AIA) é cuidadosamente isolada das estruturas circundantes. Os vasos ramificados são ligados e ambas as extremidades do AIA são pinçadas para evitar o fluxo sanguíneo antes da ressecção. Posteriormente, o IAA do doador é implantado em um camundongo...

O vídeo demonstra um método cirúrgico para gerar um modelo de camundongo de transplante de baço heterotópico vascularizado. A cavidade abdominal de um camundongo doador anestesiado é aberta cirurgicamente para remover o baço. A veia cava inferior e a aorta infrarrenal são identificadas, seus ramos lombares são ligados e aberturas são feitas para o transplante heterotópico de um baço de um camundongo doador congênito. Ao completar a anastomose vascular e restaurar o fluxo sanguíneo para o baço...

O vídeo demonstra um método para gerar um modelo de rato com desmielinização cortical cerebral generalizada. Isso envolve a interrupção da barreira hematoencefálica injetando citocinas pró-inflamatórias em camundongos preparados com proteína recombinante da bainha de mielina. Esse processo facilita a infiltração de células imunológicas, resultando em desmielinização cortical cerebral generalizada.

O vídeo demonstra a geração de um modelo de pele ovina ex vivo infectado com Staphylococcus aureus. Isso envolve tratar a seção de biópsia da pele da testa de um cordeiro com antibióticos, estabelecer um leito da ferida, posicioná-lo em uma membrana permeável em uma placa multipoços com meio livre de antibióticos e estabelecer infecção bacteriana na ferida cutânea.

O vídeo demonstra um método para transferir diretamente o DNA do plasmídeo que codifica a interleucina-15 para o tecido da pele de um modelo de camundongo deficiente em interleucina-15 por meio de acupuntura usando microagulhas. Essas microagulhas geram micropunções na camada mais externa da pele, facilitando a absorção e transfecção do DNA do plasmídeo para as células epidérmicas, incluindo os queratinócitos, dentro do tecido cutâneo.

Este vídeo demonstra um procedimento de transplante de microbiota fecal em um camundongo deficiente em interleucina-10 com inflamação do cólon. Os micróbios fecais colonizados no intestino liberam metabólitos secundários, provocando a liberação de citocinas anti-inflamatórias e reduzindo a inflamação do cólon.

Este vídeo demonstra um método para gerar um modelo de camundongo humanizado duplo com um sistema imunológico humano e células hepáticas. Envolve o transplante de células hepáticas humanas e células-tronco hematopoiéticas e progenitoras em um camundongo imunodeficiente transgênico por meio de injeção intraesplênica, levando ao enxerto de células hepáticas e ao desenvolvimento de células imunes humanas.

O vídeo demonstra a técnica de terapia fágica direcionada à infecção por Pseudomonas aeruginosa em embriões de peixe-zebra com fibrose cística. A terapia fágica diminui efetivamente a carga bacteriana e mitiga as respostas imunes pró-inflamatórias em embriões de peixe-zebra com FC infectados com bactérias, levando à redução da letalidade do embrião de FC.

Este vídeo demonstra uma técnica para injetar plasma rico em plaquetas (PRP) no tendão de Aquiles seccionado de ratos. Um pequeno segmento é excisado do tendão de Aquiles de um rato receptor, o local é suturado e o rato pode se recuperar. Ao mesmo tempo, o sangue total é coletado de um rato doador e centrifugado para obter o PRP, que é então ativado e injetado no local suturado do rato receptor para induzir o reparo do tendão.

O vídeo demonstra uma técnica para gerar um modelo de camundongo humanizado com imunidade projetada baseada em células-tronco contra o vírus da imunodeficiência humana (HIV). O tecido do timo fetal humano e as células-tronco hematopoiéticas (HSCs) projetadas são implantados na cápsula renal de um camundongo gravemente imunocomprometido. As HSCs, que expressam receptores de antígenos quiméricos (CARs) contra o HIV, são misturadas em uma mistura de proteínas gelatinosas que promove sua...

Este vídeo mostra a administração oral de células de levedura transformadas em um modelo de camundongo. As células de levedura transformadas são administradas por via oral usando uma técnica de gavagem, atingindo o estômago do camundongo. Mais tarde, as células migram para o intestino delgado, onde as células microdobradas as engolfam e facilitam sua transferência para as placas de Peyer e obtêm acesso ao sistema imunológico intestinal.

Este vídeo mostra a canalostomia, um procedimento que permite a administração local de drogas no ouvido interno de um camundongo através do canal semicircular com danos mínimos à audição e à função vestibular. Este método permite a inoculação de vetores virais, produtos farmacêuticos e pequenas moléculas no ouvido interno do camundongo.

Este vídeo demonstra um método baseado em imagem para visualizar células beta transplantadas que expressam luciferase em um camundongo imunodeficiente diabético não obeso. A introdução de esplenócitos de um camundongo diabético leva à destruição progressiva das células beta, visualmente confirmada pelo declínio da luminescência após a introdução do substrato.

Este vídeo demonstra um ensaio de vacinação tumoral baseado em células. Um camundongo, injetado por via intradérmica com células de melanoma B16-F10 para formação de tumor, é vacinado com células B16-F10 secretando citocina Flt3L perto do tumor desenvolvido. O Flt3L secretado da vacina promove a maturação e proliferação de células dendríticas que então apresentam antígenos tumorais para células T nos gânglios linfáticos, desencadeando uma resposta imune antitumoral direcionada.

Este vídeo demonstra um método para gerar vacinas de vesícula de membrana externa (OMV) com exibição multivalente. As células de mamíferos são transfectadas para expressar e secretar antígenos virais fundidos a um SpyTag e a uma etiqueta de poli-histidina. Esses antígenos são então purificados usando uma coluna de afinidade de ácido nitrilotriacético (Ni-NTA). O antígeno purificado é misturado com vesículas de membrana externa que expressam a proteína SpyCatcher (SC) ligada à superfície. Vários...

Este vídeo demonstra a produção de vacinas tumorais em nanoemulsão. Os depósitos estáveis de reservatórios de petróleo que transportam peptídeos sintéticos e adjuvantes são produzidos por nanoemulsão de baixa energia, oferecendo uma promessa significativa para a imunoterapia tumoral.

Este vídeo demonstra a imunização intranasal com BCG em camundongos, ativando respostas imunes inatas e adaptativas, levando ao desenvolvimento de células T de memória residentes no pulmão e células B efetoras, aumentando assim a proteção contra infecções por Mycobacterium.

O vídeo mostra um método para criar vírus influenza recombinantes adaptados ao frio. Envolve a transfecção de células humanas com plasmídeos bidirecionais, seguida de incubação em incubação de temperatura mais baixa para produzir vírus adequados para a produção de vacinas, caracterizada por replicação reduzida em condições mais quentes.

Este vídeo demonstra um método para a geração de uma nova plataforma baseada em bolha de polímero ou polibolha que permite a liberação retardada de explosão. Polímeros à base de poliéster são usados para formar as polibolhas com estrutura núcleo-casca, e pequenas moléculas e antígenos podem ser usados como carga.

Este vídeo demonstra um ensaio in vitro para estudar os efeitos anticancerígenos do sobrenadante livre de células de Lactobacillus (LCFS). Ao expor os esferóides do câncer colorretal a doses variadas de LCFS, a interação com os metabólitos bacterianos no LCFS induz apoptose nas células cancerígenas, interrompendo a estrutura esferóide e levando à morte celular de maneira dose-dependente.

Este vídeo demonstra um método para gerar uma vacina candidata de mRNA usando nanopartículas poliméricas. O polímero catiônico interage com o mRNA carregado negativamente, formando poliplexos. A formação de poliplexos estabiliza o mRNA, tornando-o um candidato potencial para futuras vacinas de mRNA em aplicações imunoterapêuticas.

Este vídeo mostra a purificação de nanopartículas de proteínas automontadas marcadas com histidina ou SAPNs usando cromatografia líquida de afinidade. As frações SAPN purificadas resultantes são adequadas para o desenvolvimento de vacinas, prometendo potenciais aplicações imunoterapêuticas.

O vídeo demonstra uma técnica de injeção guiada por ultrassom para administrar drogas terapêuticas nas glândulas salivares de um paciente humano.

O vídeo demonstra uma técnica de carregamento de antígenos no Mycobacterium bovis BCG para melhorar suas propriedades imunogênicas. O método usa o sistema avidina-biotina para revestir a superfície bacteriana com antígenos exógenos.

O vídeo demonstra um ensaio in vitro para triagem de interferons com atividade antiviral contra o vírus Zika, um patógeno humano. Dentro da célula hospedeira, o vírus Zika sofre multiplicação após a internalização, infectando células vizinhas e criando zonas distintas ou placas virais. O interferon tipo I, atuando como agente antiviral, dificulta a multiplicação do vírus, impedindo assim a formação de placas virais na monocamada da célula hospedeira.

Este vídeo demonstra um ensaio para imunizar um modelo de camundongo com esporozoítos vivos atenuados. Os esporozoítos de Plasmodium atenuados por radiação são injetados no lado dorsal da orelha do camundongo. Após injeções em vários locais em ambas as orelhas, o camundongo pode se recuperar.