Um ensaio in vitro para triagem de interferons como inibidores potentes do crescimento do vírus Zika

Neste artigo

Resumo

Fonte: Contreras, D. et al., Sistema de Cultura de Células Infecciosas do Vírus Zika e o Efeito Profilático In Vitro dos Interferons. J. Vis. Exp. (2016)

O vídeo demonstra um ensaio in vitro para triagem de interferons com atividade antiviral contra o vírus Zika, um patógeno humano. Dentro da célula hospedeira, o vírus Zika sofre multiplicação após a internalização, infectando células vizinhas e criando zonas distintas ou placas virais. O interferon tipo I, atuando como agente antiviral, dificulta a multiplicação do vírus, impedindo assim a formação de placas virais na monocamada da célula hospedeira.

Protocolo

1. Biblioteca de citocinas de triagem contra a infecção pelo zika vírus

Semeie células Vero virgens a 1 x 10⁵ células por poço usando uma placa de 12 poços. Uma vez que as células estejam ligadas (6 horas após a semeadura), adicione cada citocina em
concentrações indicadas em duplicados biológicos (2 ml volume/alvéolo). Inclua o controle exclusivo do veículo (PBS).
Às 12 horas após o tratamento, realize a infecção pelo vírus Zika (MOI de 0,1 em 400 μl por poço). Incluir poços de controle negativo sem infecção (simulado).
Às 4 horas após a infecção, substitua o inóculo viral por meio tratado com citocinas (2 ml). Incubar as células a 37 °C durante mais 44 horas.
Às 48 horas após a infecção, conte as placas virais usando um microscópio de contraste de fase e adquira imagens representativas das células infectadas com aumento de 40X (Figura 1).

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Resultados

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Figura 1: Os interferons demonstram potente atividade viral anti-Zika. (A) Gráfico mostrando a modulação do crescimento viral do Zika por várias citocinas em comparação com o controle do veículo. Os valores médios e o desvio padrão são mostrados no gráfico de barras. Os interferons mostraram inibição estatisticamente significativa da replicação do vírus Zika (valor d...