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Gerando junções neuromusculares usando um dispositivo microfluídico

July 8th, 2025

In This Article

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Fonte: Stoklund Dittlau, K. et al., Geração de Unidades Motoras Humanas com Junções Neuromusculares Funcionais em Dispositivos Microfluídicos. J. Vis. Exp. (2021)

O vídeo demonstra a formação de junções neuromusculares usando um dispositivo microfluídico. As células precursoras neurais e as células progenitoras musculares são semeadas em diferentes poços dentro do dispositivo e deixadas para amadurecer em neurônios motores e miotubos, respectivamente. A criação de um gradiente de volume e químico leva ao desenvolvimento de junções neuromusculares ativas.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Todos os procedimentos que envolvem coleta de amostras foram realizados de acordo com as diretrizes do IRB do instituto.

Todos os reagentes e equipamentos utilizados neste protocolo estão listados na Tabela de Materiais e devem ser usados estéreis. A mídia deve ser aquecida à temperatura ambiente (RT) antes do uso, a menos que especificado de outra forma. Para obter uma visão geral do protocolo de cocultura, consulte a Figura 1.

1. Diferenciação de progenitores de neurônios motores de células-tronco pluripotentes induzidas (iPSCs)

  1. Siga o protocolo de ....

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Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

figure-results-1
Figura 1: Visão geral esquemática do protocolo da unidade motora em dispositivos microfluídicos. Linha do tempo de diferenciação e visão geral da co-cultura do dia 0 ao dia 28 de acordo com a linha do tempo do protocolo de diferenciação do neurônio motor. A diferenciação do neurônio motor das iPSCs é iniciada no dia 0 e realizada conforme indicado anteriormente nos 10 dias seguintes. No dia 9, o dis.......

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Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
Não há conflitos de interesse declarados.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
Ácido acéticoCHEM-Lab NVCL00.0116.1000Componente de revestimento. H226, H314. Pág. 280
Agrin (proteína humana recombinante)Sistemas de P&D6624-AG-050Suplemento de mídia
Ácido ascórbicoSigmaA4403Componente de mídia
βIII-tubulina (Tubulina)Abcamab7751Anticorpo (1:500)
β-mercaptoetanolThermo Fisher Scientific31350010Componente de mídia. H317. Pág. 280.
B-27 sem vitamina AThermo Fisher Scientific12587-010Componente de mídia
BDNF (fator neurotrófico derivado do cérebro)Peprotech450-02BFator de crescimento
bFGF (fator de crescimento básico de fibroblastos humanos recombinantes)Peprotech100-18BFator de crescimento
Colágeno de couro de bezerroThermo Fisher Scientific17104019Componente de revestimento
CNTF (fator neurotrófico ciliar)Peprotech450-13BFator de crescimento
DAPTTocris Biociência2634Suplemento de mídia
DMEM/F12Thermo Fisher Scientific11330032Componente de mídia
DMSOSigmaD2650-100MLComponente de criopreservação. H315, H319, H335. Pág. 280.
Solução salina tamponada com fosfato de Dulbecco (DPBS)Thermo Fisher Scientific14190250sem cálcio, sem magnésio
EtanolVWR20.821.296Esterilização. H225. Pág. 280
Soro fetal bovinoThermo Fisher Scientific10270106Componente de mídia
Meio de montagem de fluorescênciaDakoS3023Componente imunocitoquímico
GDNF (fator neurotrófico derivado da linhagem de células gliais)Peprotech450-10BFator de crescimento
Soro de cavaloThermo Fisher Scientific16050122Componente de mídia
IMDMThermo Fisher Scientific12440053Componente de mídia
Insulina transferrina selênioThermo Fisher Scientific41400045Componente de mídia
Reposição de soro nocauteThermo Fisher Scientific10828-028Componente de criopreservação
Laminina da membrana basal do sarcoma murino de Engelbreth-Holm-SwarmSigmaL2020-1MGComponente de revestimento e suplemento de mídia
L-glutaminaThermo Fisher Scientific25030-024Componente de mídia
Suplemento N-2Thermo Fisher Scientific17502-048Componente de mídia
Meio neurobasalThermo Fisher Scientific21103049Componente de revestimento e mídia
Aminoácidos não essenciaisThermo Fisher Scientific11140050Componente de mídia
Parafilme MSigmaPág. 7793-1EAArmazenamento de equipamentos
Penicilina/Estreptomicina (5000 U/mL)Thermo Fisher Scientific15070063Componente de mídia
Placa de Petri (3 cm)nunc153066Diâmetro: 3 cm
Placa de Petri (10 cm)Sarstedt833.902Diâmetro: 10 cm
Placa (6 poços)Cellstar Greiner bio-one657160Placa de cultura
Poli-L-ornitina (OLP)SigmaRolamento P3655-100MGComponente de revestimento
Ácido retinóicoSigmaR2625Suplemento de mídia. H302, H315, H360FD, H410. Pág. 280.
Suplemento celular RevitaThermo Fisher ScientificA2644501Solução inibidora de ROCK
Agonista suavizadoMerch Millipore566660Suplemento de mídia
Piruvato de sódioTecnologias da Vida11360-070Componente de mídia
Frasco T75SigmaCLS3276Placa de cultura
TrypLE expressThermo Fisher Scientific12605010Solução de dissociação MAB
Cloridrato de tubocirarina pentahidratadoSigmaT2379-100GBloqueador do receptor de acetilcolina. H301. Pág. 280.
Dispositivo microfluídico pré-montado XonaChipsXona MicrofluídicaXC150Comprimento do microsulco: 150 μm

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