Isolamento e cultura de neurônios primários e glia de uma bexiga urinária de rato

Resumo

Fonte: Wang, R. et al., Isolamento e Cultura de Neurônios Primários e Glia da Bexiga Urinária de Rato Adulto. J. Vis. Exp. (2020).

Este vídeo demonstra uma técnica para gerar uma cultura primária de neurônios e glia da bexiga urinária de um rato. Ele descreve as etapas envolvidas na preparação do tecido, digestão enzimática para obter células únicas e cultura das células em um meio específico de neurônio para estabelecer uma cultura neuronal e glial primária.

Protocolo

Todos os procedimentos envolvendo modelos animais foram revisados pelo comitê institucional local de cuidados com animais e pelo conselho de revisão veterinária JoVE.

1. Preparação de materiais

1. Esterilize todos os instrumentos e ddH₂O usando uma autoclave antes de realizar o experimento. Os instrumentos incluem, entre outros, tesouras cirúrgicas, tesouras oftálmicas, pinças, colheres, divisor de núcleo, pratos de vidro (60 a 100 mm de diâmetro) e copos de vidro.
2. Preparar a solução de Krebs (Tabela 1): Dissolver todos os produtos químicos com ddH₂O antes de utiliza....

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
0,25% de tripsina	Gibico	15050065	Digestão enzimática
Placa de cultura de 48 poços	Corning	3548	Prato de revestimento
Antibiótico/antimicótico	Gibico	15240062	Meios de cultura/meios de enxágue
B-27	Gibico	17504044	Meios de cultura
BSA Fração V	Gibico	332	Digestão enzimática
Incubadora de CO2	Heraeus	B16UU	Cultura de células
Colagenase tipo II	sigma	2593923	Digestão enzimática
DMEM/F-12	Gibico	11330032	Meios de enxágue
Soro fetal bovino	Gibico	10100147	Meios de cultura/meios de enxágue
fórceps	Xangai Jin Zhong Dispositivos Médicos	1383	10 cm; Operação estéril
Copos de vidro	Huan Qiu Dispositivos Médicos	1101	50 ml; Operação estéril
Lamínulas de vidro	WHB Científico	WHB-48-CS	Prato de revestimento
Pratos de vidro	Huan Qiu Dispositivos Médicos	1177	100 mm; Operação estéril
Banco de fluxo laminar	Su Jie Dispositivos Médicos	CB 1400V	Operação estéril
GDNF Murino	Peprotech	AF45044	Meios de cultura
Meio Neurobasal-A	Gibico	10888022	Meios de cultura
Tesoura oftálmica	Xangai Jin Zhong Dispositivos Médicos	J21010	12,5 cm; Operação estéril
Pipetas	Eppendorf	3120000240	100-1000 ul; Pipetagem de reagentes e amostras
Pipetas	Eppendorf	3120000267	10-100 ul; Pipetagem de reagentes e amostras
Poli-D-lisina	sigma	Pág. 7280	Prato de revestimento
Centrífuga refrigerada	Instrumento Ping Fan	TGL-16A	Digestão enzimática
Incubadora de agitação	Instrumentos de laboratório Haimen Kylin-Bell	T8-1	Digestão enzimática
Divisor de núcleo de colheres	Xangai Jin Zhong Dispositivos Médicos	YZR030	12 cm; Operação estéril
Tesoura cirúrgica	Xangai Jin Zhong Dispositivos Médicos	J21130	16 cm; Operação estéril
Toalha cirúrgica	Fu Kang Dispositivos Médicos	5002	40 x 50 cm; Operação estéril
Laminina	sigma	L2020	Prato de revestimento
L-glutamina	Gibico	25030081	Meios de cultura