Estabelecendo um tumor cerebral em um modelo de co-cultura de fatia organotípica

Resumo

Fonte: Chadwick, E. J. et al. Um sistema de co-cultura de tumor cerebral/fatia organotípica para estudar o microambiente tumoral e terapias medicamentosas direcionadas. J. Vis. Exp. (2015).

Este vídeo demonstra o desenvolvimento de um sistema de co-cultura 3D. Fatias de cérebro de camundongo são colocadas em uma membrana e células tumorais cerebrais humanas marcadas com fluorescência podem crescer nela. Uma vez que o sistema está pronto, ele é corado para imagens.

Protocolo

Todos os procedimentos que envolvem coleta de amostras foram realizados de acordo com as diretrizes do IRB do instituto.

1. Colocando as fatias nas inserções

1. Encha cada alvéolo de uma placa de 6 poços com 1.200 μl de meio de cultura em fatias. Encha todos os poços não utilizados com 1.200 μl de PBS e preencha o espaço central da placa com 5 ml de PBS 1x. Conservar esta placa a 37 °C.
2. Usando a ferramenta de escumadeira, coloque uma fatia de cérebro na mídia na inserção, empurrando suavemente a fatia para ficar totalmente submersa. Repita para todas as fatias.
3. Use um p1000 para retirar 1 ml de ....

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
HEPES	Invitrogen	17504044
glicose	Invitrogen	17502048
Penicilina estreptomicina	Tecnologias da Vida	15140-122
HBSS	Tecnologias da Vida	14185-052
B-27	Tecnologias da Vida	Rolamento 17504-044
N2	Tecnologias da Vida	17502-048
Glutamamax	Tecnologias da Vida	35050061
Neurobasal-A- Meio menos vermelho de fenol	Invitrogen	12349015
Baixo ponto de fusão Agarose	Promega	V2111
Inserções de cultura de fatia	Milipore	PICM0RG50
Laminina	Invitrogen	23017015
Cm-DiI	Invitrogen	Rolamento V22888
Microesferas	Tecnologias da Vida	F-21010