Desenvolvendo um modelo de cultura de células triplas da barreira hematoencefálica humana

Resumo

Fonte: Fattakhov, N., et al. Um modelo triplo de cultura de células primárias da barreira hematoencefálica humana para estudar o AVC isquêmico in vitro. (2022)

Este vídeo demonstra a co-cultura de células pericitos, astrócitos e endoteliais do cérebro humano. Cada camada celular é formada separadamente e depois cultivada em conjunto, criando um sistema de três camadas que imita o arranjo celular da barreira hematoencefálica

Protocolo

1. Configuração do modelo BBB de cultura de células triplas

1. Semeando pericitos
   1. Cultivar HBVP (pericitos vasculares do cérebro humano) em frascos de cultura T75 com uma superfície ativada para adesão celular dentro de uma incubadora de CO₂ a 5% a 37 °C até ficar confluente. Uma vez alcançada a confluência, aspire o meio pericitário antigo e lave as células com 5 mL de solução salina tamponada com fosfato de Dulbecco quente (DPBS). Aspire a DPBS e retire as células do frasco usando uma combinação de 4 mL de solução quente de tripsina-EDTA e 1 mL de DPBS.
      NOTA: Evite usar passagens posteriores a....

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Transwell de 24 mm com inserção de membrana de poliéster de poros de 0,4 μm	Corning	3450
Pratos com fundo de vidro de 35 mm	MatTek Ciências da Vida (FISHERSCI)	P35GC-1.5-14-C
Meio Astrócito	Célula de Ciência	1801
Fator de Apego	Sistemas Celulares (Fisher Scientific)	4Z0-201
Complete Classic Medium com Sérum e CultureBoost	4Z0-500	Sistemas Celulares
Tubos de centrífuga Corning 50 mL PP (fundo cônico com tampa CentriStar	VWR	430829
Corning 75cm² em forma de U pescoço inclinado não tratado frasco de cultura de células	Corning	Rolamento 431464U
Microplacas de Poliestireno Preto de Fundo Transparente Plano de 96 poços Corning CellBIND	Corning	3340
Lâminas de Câmara de Contagem de Células Countes	Thermo Fisher Científico	C10228
Contador de Células Automatizado Countess II FL	Thermo Fisher Científico	ZGEXSCCOUNTESS2FL
Meio DMEM (sem glicose, sem glutamina, sem vermelho de fenol)	ThermoFisher	A14430-01	Meio sem glicose
DPBS (sem cálcio, sem magnésio)	ThermoFisher	14190250
EBM Crescimento de Células Endoteliais Meio Basal, Sem Vermelho de Fenol, 500 mL	Lonza	CC-3129
Incubadora de CO2
centrifuga