Diferenciando células-tronco embrionárias humanas em oligodendrócitos

Resumo

Fonte: Assetta, B., et al. Geração de neurônios humanos e oligodendrócitos a partir de células-tronco pluripotentes para modelagem de interações neurônio-oligodendrócitos. J. Vis. Exp (2020).

Este vídeo demonstra o processo de geração de células precursoras de oligodendrócitos (OPCs) a partir de células-tronco embrionárias humanas, seguido pela maturação de OPCs em oligodendrócitos. Esse processo de geração de oligodendrócitos abre vários caminhos para melhorar a pesquisa e o tratamento de doenças neurodegenerativas, incluindo a doença de Alzheimer.

Protocolo

1. Indução de células precursoras de oligodendrócitos humanos (OPC) a partir de células-tronco pluripotentes e maturação de oligodendrócitos

1. Geração de células progenitoras neurais (NPC): protocolo de monocamada (~7 dias). Consulte a Figura 1A para obter o fluxo.
   1. Use células ES humanas H1 disponíveis comercialmente na passagem de 52 (ver Tabela de Materiais). Cultive as células em placas de 6 poços revestidas com solução de matriz extracelular (~ 0,5 mg de solução de matriz por placa de 6 poços; consulte a Tabela de Materiais) usando meio de manutenção de células ES (consulte a Tabela d....

Resultados

Figura 1: Geração de iOPC (célula precursora de oligodendrócitos induzidos) e maturação de iOL (oligodendrócitos induzidos). (A) Fluxograma de geração de iOPC e iOL. (B) Imagens representativas de campo claro e imunofluorescência de iOPCs no dia 15. Olig2 (marcador pan-oligodendroglia) é mostrado em verde, O4 (marcador OPC) em vermelho e DAPI em azul. A imagem revelo.......

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Accutase	Tecnologias STEMCELL	7920
Suplemento B27	ThermoFisher	17504044
bFGF	ThermoFisher	PHG 0266
acampamento	MilliporeSigma	A9501
Clemastina	MilliporeSigma	SML0445
Meio DMEM/F12	Tecnologias STEMCELL	Rolamento 36254
Dmso	ThermoFisher	D12345
Soro fetal bovino	ScienCell	10
Células ES humanas H1	WiCell	WA01
Matrigel	Corning	354234
mTeSR plus	Tecnologias STEMCELL	Rolamento 5825
Suplemento N2	ThermoFisher	17502001
Meio neurobasal A	ThermoFisher	Rolamento 10888-022
Aminoácidos não essenciais	ThermoFisher	Rolamento 11140-050
PDGF-AA	Sistemas de P&D	221-AA-010
pMDLg/pRRE	Addgene	Rolamento 12251
Polibreno	MilliporeSigma	TR-1003-G
pRSV-REV	Addgene	12253
Inibidor de ROCK Y-27632	Tecnologias STEMCELL	Rolamento 72302
Sag	Tocris	Nº 4366
Mídia de congelamento de progenitor neural STEMdiff	Tecnologias STEMCELL	Rolamento 5838
Kit de indução neural STEMdiff SMADi	Tecnologias STEMCELL	Nº 8581
Triiodotironina T3	MilliporeSigma	T6397
Tempo-iOlogo: OPCs derivados de iPSC humanos	Tempo BioScience	Referência102
TetO-Ng2-Puro	Addgene	Rolamento 52047
VSV-G	Addgene	Rolamento 12259