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Artigo de método
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8 de julho de 2025
Fonte: Lin, G. L. et al., Um Protocolo para Cultura Rápida de Células Post-mortem de Glioma Pontino Intrínseco Difuso (DIPG). J. Vis. Exp. (2017)
Este vídeo demonstra o processo de isolamento e cultura de células progenitoras gliais de glio pontino intrínseco difuso ou tecido do tronco cerebral afetado por DIPG. Células gliais isoladas do tecido tumoral via uma digestão enzimática são cultivadas em meio neurobasal, o que promove seu crescimento e o desenvolvimento de neuroesferas flutuantes.
Todos os procedimentos envolvendo participantes humanos foram realizados em conformidade com as diretrizes institucionais, nacionais e internacionais para o bem-estar humano e foram revisados pelo conselho de revisão institucional local.
1. Obtenção de amostras de tecido
NOTA: Um componente crítico deste protocolo requer o manuseio adequado da doação de tecido começando imediatamente no momento da autópsia. A viabilidade geral da amostra depende significativamente da minimização do Intervalo Post-Mortem (PMI), transferindo imediatamente o tecido para o meio frio apropriado suplemen....
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Figura 1. Amostra de autópsia de um tumor pontino. Aparência post-mortem imediata de um glioma pontino intrínseco difuso. O tumor aparece como uma grande massa rica em mielina na superfície ventral da ponte.
Figura 2. Amostras de tecido em vários estágios de p.......
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| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| hibernar-a | Gibco | A12475-01 | |
| HBSS com Cálcio/Magnésio | Gibco | 24020-117 | |
| HBSS | Corning | 21-022-CV | |
| HEPES | Gibco | 15630-080 | |
| Liberase DH (colagenase/dispase) | Roche | 5401054001 | |
| DNAse I | Worthington Bioquímica | LS002007 | |
| Sacarose | Sigma | S0389 | |
| Antibiótico/Antimicótico | Gibco | 15240-096 | |
| Neurobasal-A | Gibco | 10888-022 | |
| DMEM/F12 | Gibco | 11330-032 | |
| GlutaMAX-I (100X) | Gibco | 35050-061 | |
| Piruvato de sódio (100mM) | Gibco | 11360-070 | |
| Suplemento B27 Menos Vitamina A | Gibco | 12587-010 | |
| Aminoácidos não essenciais MEM (100X) | Gibco | 11140-050 | |
| PDGF-AA | Biotecnologia Shenandoah | 100-16 | |
| PDGF-BB humano | Biotecnologia Shenandoah | 100-18 | |
| EGF humano | Biotecnologia Shenandoah | 100-26 | |
| FGF humano | Biotecnologia Shenandoah | 100-146 | |
| Lâminas de bisturi estéreis | Bardo Paker | 372610 | |
| Hemostáticos curvos | Ferramentas de Belas Ciências | 13013-14 | |
| Lâminas de barbear | VWR | 5411-050 | |
| Placa de cultura de células de 100 x 20 mm | Corning | 353003 | |
| Pinça estéril | TWD Tradewinds | DF8988-5 | |
| Cortinas estéreis | 3M | 2037 | |
| Luvas estéreis | Kimberly Clark | 1182307 | |
| Buffer de lise ACK | Gibco | A1049201 | |
| Filtro de malha de 100 mícrons | Fisher | 352360 | |
| Tubo cônico de 50 mL | Fisher | 1495949A |
