Uma técnica para gerar organoides cerebrais a partir de células-tronco embrionárias humanas

Resumo

Fonte: Boisvert, E. M., et al. Um método estático autodirigido para gerar organoides cerebrais a partir de células-tronco embrionárias humanas. J. Vis. Exp (2020).

Este vídeo demonstra uma técnica para gerar organoides cerebrais a partir de células-tronco embrionárias humanas (hESCs). A cultura aderente de colônias de hESC é tratada com enzimas para desprepará-las e quebrá-las em cachos. Esses aglomerados formam esferas tridimensionais em suspensão, que são então induzidas a se diferenciar em organoides que imitam o córtex cerebral com camadas de neurônios e células gliais.

Protocolo

1. Manutenção de células-tronco

1. Mantenha as hESCs H9 em uma camada de matriz de membrana basal reduzida pelo fator de crescimento (consulte a Tabela de Materiais, doravante simplesmente chamada de matriz) de acordo com as instruções do fabricante.
   1. Para revestir uma placa de 6 poços ou uma placa de 10 cm, combine 100 μL de matriz com 5,9 mL de meio Eagle modificado (DMEM) / F12 de Dulbecco gelado. Embrulhe as placas em filme de parafina e armazene durante a noite a 4 °C. Use-as no dia seguinte para células em passagem após a aspiração do excesso de matriz/meio.
2. Cultive as células semana a....

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Suplemento B27	Gibco, Waltham, MA, EUA	Rolamento 17504-044
bFGF	Life Technologies, Carlsbad, CA, EUA	PHG0263
Bsa	Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, EUA	Rolamento A9647
Exibir	STEMCELL Technologies, Vancouver, Canadá	Nº 7913
DMEM/F12	Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, EUA	11330-032
DPBS	Gibco, Waltham, MA, EUA	10010023
Fator de crescimento reduzido Matrigel (matriz)	Corning, Corning, NY, EUA	356231
H9 hESCs	WiCell, Madison, WI, EUA	WA09
heparina	Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, EUA	9041-08-01
L-glutamina	Gibco, Waltham, MA, EUA	Rolamento 25030-081
Monotioglicerol	Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, EUA	M6145
Mídia mTESR	STEMCELL Technologies, Vancouver, Canadá	85850
N2 NeuroPlex	Gemini Bio Products, West Sacramento, CA, EUA	400-163
NEAA	Gibco, Waltham, MA, EUA	Rolamento 11140-050
Tritão X-100	Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, EUA	T8787-100ML
Frascos T75 de fixação ultrabaixa	Corning, Corning, NY, EUA	3814