Isolando células-tronco derivadas de tecido adiposo do tecido adiposo periaórtico murino

Resumo

Fonte: Qi, Y., et al. Isolamento, Cultura e Indução Adipogênica de Células-Tronco Derivadas do Tecido Adiposo Originário da Crista Neural do Tecido Adiposo Periaórtico. J. Vis. Exp. (2020)

Este vídeo demonstra uma técnica para isolar e cultivar células-tronco derivadas do tecido adiposo do arco periaórtico murino marcadas com fluorescência (ADSCs) do tecido adiposo do arco periaórtico murino. Após o isolamento, os NCADSCs são detectados, classificados usando classificação de células ativadas por fluorescência e, posteriormente, cultivados em uma placa, promovendo a proliferação celular.

Protocolo

Todos os procedimentos que envolvem coleta de amostras foram realizados de acordo com as diretrizes do IRB do instituto.

1. Isolamento da fração vascular estromal (SVF)

Colete o tecido adiposo do arco periaórtico (PAAT) de 5-6 camundongos em um tubo de microcentrífuga de 2 mL contendo 1 mL de meio de digestão recém-preparado e pique o tecido usando uma tesoura cirúrgica em um tubo Eppendorf à temperatura ambiente (RT).

1. Transfira a mistura para tubos de 50 mL contendo 9 mL do meio de digestão. Homogeneizar os tecidos pipetando para cima e para baixo com uma pipeta de 1 mL 10x.

Resultados

Figura 1: Diferenciação adipogênica de NCADSCs isoladas de PAAT. (A) Esquema geral de bloqueio para caracterizar e classificar populações de NCADSCs (RFP). (B) As imagens do microscópio de fluorescência mostram que os NCADSCs aderiram e se expandiram após 96 h de semeadura em uma placa de cultura de 12 poços. (C-G) Imagens representativas mostrando q.......

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Bsa	Ciências da vida da VWR	0332-100G	Concentração de trabalho de 50 mg/mL; lote #: 0536C008
Colagenase Tipo I	Gibco	17018029
Tampão de lise de eritrócitos	Invitrogen	00-4333
FBS	Corning	R35-076-CV	Concentração de trabalho de 50 mg/mL; lote #: R2040212FBS
HBSS	Gibco	14025092
HDMEM	Gelifesciences	SH30243.01	Lote #: AD20813268
PBS (solução salina tamponada com fosfato)	ABCONE (China)	Pág. 41970
Penicilina-estreptomicina	Gibco	15140122