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Artigo de método
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8 de julho de 2025
Fonte: Brzica, H., et al,. Um método simples e reprodutível para preparar amostras de membrana de microvasos cerebrais de ratos recém-isolados. J. Vis. Exp. (2018).
Este vídeo demonstra o processo de isolamento de microvasos cerebrais de ratos sacrificados. Inclui a dissecção do cérebro, limpeza do tecido e digestão mecânica, seguida de centrifugação repetida para isolar a fração pura dos microvasos.
Todos os procedimentos que envolvem a coleta de amostras foram realizados de acordo com as diretrizes do IRB do instituto. O fluxo processual para o protocolo é representado na Figura 1.
1. Configuração para o procedimento
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Figura 1: Esboço de procedimentos e protocolos para isolar microvasos cerebrais de ratos e preparar amostras de membrana
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| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Coquetel de inibidores de protease | Sigma-Aldrich | #P8340 | Componente do tampão de microvasos cerebrais |
| D-manitol | Sigma-Aldrich | #M4125 | Componente do tampão de microvasos cerebrais |
| EGTA | Sigma-Aldrich | #E3889 | Componente do tampão de microvasos cerebrais |
| Base Trizma | Sigma-Aldrich | #T1503 | Componente do tampão de microvasos cerebrais |
| Dextrano (MW 75.000) | Spectrum Chemical Mftg Corp | #DE125 | Dextrano usado em etapas de centrifugação para separar microvasos do parênquima cerebral |
| Cetamina | MWI Saúde Animal | #501072 | Anestésico geral |
| xilazina | Fornecimento Médico Ocidental | #5530 | Anestésico geral |
| Solução salina a 0,9% | Fornecimento Médico Ocidental | N/A | Diluente anestésico geral |
| Papel de filtro (12,5 cm de diâmetro) | VWR | #28320-100 | Usado para remoção de meninges do tecido cerebral |
| Tubos de centrífuga | Sarstedt | #60.540.386 | Tubos descartáveis usados para etapas de centrifugação de dextrano |
| Ensaio Pierce™ Coomassie Plus (Bradford) | ThermoFisher Scientific | #23236 | Medição da concentração de proteínas em preparações de membranas |
| Homogeneizador de energia aérea Wheaton | DWK Ciências da Vida | #903475 | Necessário para homogeneização de amostras |
| 10.0ml almofariz de vidro e moedor de tecido pilão | DWK Ciências da Vida | #358039 | Necessário para homogeneização de amostras |
| ácido clorídrico | Sigma-Aldrich | #H1758 | Necessário para ajuste de pH de tampões |
| Fórceps padrão | Ferramentas de Belas Ciências | #91100-12 | Usado para dissecção de tecido cerebral |
| Rongeurs de Friedman-Pearson | Ferramentas de Belas Ciências | #16020-14 | Usado para abrir o crânio para isolar o cérebro |
| Tubos de centrífuga cônicos de 50 ml | ThermoFisher Scientific | #352070 | Usado para coleta de tecido cerebral após isolamento |
| Pipetas de vidro Pasteur | ThermoFisher Scientific | #13-678-20C | Usado para aspiração de detritos celulares após spins de dextrana |
| Etanol anidro | Sigma-Aldrich | #459836 | Usado para limpeza de moedor de tecidos; diluído a 70% com água destilada |
| cetamina | |||
| Balde de gelo |
