Preparação de fatias colículo-talamocorticais de um cérebro de filhote de camundongo

Resumo

Fonte: Slater, B. J., et al., Modificação de uma fatia de cérebro de camundongo colículo-tálamo-cortical, incorporando impressão 3D de componentes de câmara e imagens ópticas em várias escalas. J. Vis. Exp. (2015)

O vídeo demonstra a preparação de fatias de cérebro colículo-tálamo-cortical de cérebros de filhotes de camundongos. Um cérebro isolado é alinhado em uma lâmina marcada e cortado em um ângulo para alinhar o mesencéfalo auditivo e o prosencéfalo no mesmo plano. O cérebro é então cortado usando um vibratome, e as fatias contendo as principais estruturas auditivas do mesencéfalo e do prosencéfalo são transferidas para uma câmara de retenção para preservação.

Protocolo

Todos os procedimentos que envolvem coleta de amostras foram realizados de acordo com as diretrizes do IRB do instituto.

1. Preparação e remoção do cérebro do mouse para fatiar

1. Prepare-se para a perfusão e incubação de fatias.
   1. Aproximadamente 30 minutos antes do corte, prepare a solução de corte com alto teor de sacarose e o líquido cefalorraquidiano artificial com baixo teor de cálcio (aCSF) para incubação do corte antes do registro ou imagem.
   2. Disponha todas as ferramentas necessárias (tesoura grande de ponta romba, tesoura de mola pequena, pinça anatômica, tesoura grande ou guilhotina, t....

Resultados

Figura 1. Imagem de autofluorescência de flavoproteína de fatia cerebral colículo-tálamo-cortical.(A) Fatia de cérebro colículo-tálamo-cortical conectada, confirmada por autofluorescência de flavoproteínas. Estimulação elétrica a 0,05 Hz de IC imageada a 4 Hz e Fourier processada para mostrar potência na frequência de estimulação. Observe a ativação do MGB, núcleo reticular talâmi.......

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Solução de corte com alto teor de sacarose			em mM: 206 sacarose, 10,0 MgCl2, 11,0 glicose, 1,25 NaH2PO4, 26 NaHCO3, 0,5 CaCl2, 2,5 KCl, pH 7,4
Baixo teor de cálcio aCSF			em mM: 126 NaCl, 3,0 MgCl2, 10,0 glicose, 1,25 NaH2PO4, 26 NaHCO3, 1,0 CaCl2, 2,5 KCl, pH 7,4
aCSF			em mM: 126 NaCl, 2,0 MgCl2, 10,0 glicose, 1,25 NaH2PO4, 26 NaHCO3, 2,0 CaCl2, 2,5 KCl, pH 7,4
Dmso	Tecnologias da Vida	D12345	Lote: 1572C502
Prato de cultura grande	Marca de pescador	08-757-13	prato da cultura de 100x15mm
Prato de cultura pequeno	falcão	353001	prato da cultura de 35x10mm
Membrana de cultura elevada	Millicell	PICMORG50	Usado para manter a perfusão de fluido oxigenado em ambos os lados da fatia.
Ágar para bloquear o cérebro			3% em peso em água