Isolamento de células de Schwann de raízes espinhais de camundongos

Resumo

Fonte: He, Q., et al., & Ding, F. Purificação de fibroblastos e células de schwann de nervos sensoriais e motores in vitro. J. Vis. Exp. (2020)

Este vídeo descreve o isolamento e a cultura de células de Schwann das raízes espinhais de camundongos. As células isoladas são então cultivadas em meios específicos. As células de Schwann são isoladas por digestão diferencial e aderência. Eles são posteriormente transferidos para lamínulas revestidas com matriz extracelular para fixação e proliferação.

Protocolo

Todos os procedimentos envolvendo modelos animais foram revisados pelo comitê institucional local de cuidados com animais e pelo conselho de revisão veterinária JoVE.

1. Isolamento e cultura de fibroblastos nervosos motores e sensoriais e SC (células de Schwann)

1. Use ratos Sprague-Dawley (SD) de sete dias de idade (n = 4) do Centro de Animais Experimentais da Universidade de Nantong da China. Coloque os ratos em um tanque contendo 5% de isoflurano por 2-3 minutos, deixe os animais respirarem lentamente e não tenham atividade independente e, em seguida, higienize com etanol a 75% antes da decapitação.
2. Use uma tesoura par....

Resultados

Figura 1: O diagrama esquemático mostrando as etapas de separação e purificação de fibroblastos sensoriais e motores e SCs.

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Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Solução salina balanceada de D-Hank	Gibco	14170112
DMEM	Corning	10-013-CV
Microscópio de dissecação	Olimpo	SZ2-ILST
Soro fetal bovino (FBS)	Gibco	10099-141C
Forscolina	sigma	Rolamento F6886-10MG
0,25% (p/v) de tripsina	Gibco	Rolamento 25200-072
Pratos culturais
Tubos de centrífuga
Lamínulas
Poli-L-lisina
Incubadora de CO2