Artigo de método

Isolando a microglia de lesões desmielinizantes do cérebro de camundongos usando classificação de células ativadas por magnetismo

8 de julho de 2025

Neste artigo

Resumo

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Fonte: Zhang, H. et al. Isolamento da Microglia Primária de Camundongos por Classificação de Células Ativadas Magneticamente em Modelos Animais de Desmielinização. J. Vis. Exp. (2022).

Este vídeo demonstra um protocolo para extrair células microgliais de lesões desmielinizantes em cérebros de camundongos usando classificação magnética de células. O protocolo envolve a dissecação do tecido cerebral lesionado contendo células microgliais, o tratamento do tecido com enzimas específicas para obter uma suspensão unicelular e a utilização de esferas magnéticas específicas do receptor microglial para isolar as células microgliais.

Protocolo

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Todos os procedimentos envolvendo amostras de animais foram revisados e aprovados pelo comitê de revisão ética animal apropriado.

1. Materiais

  1. Prepare as seguintes soluções antes de iniciar o protocolo:
    1. Prepare o tampão de carga adicionando soro fetal bovino (FBS, 2%) à solução salina tamponada com fosfato (PBS).
    2. Adicione corante vermelho neutro (NR) (1% final) ao PBS.
  2. Prepare as seguintes soluções usando o Kit de Dissociação Cerebral Adulto disponível comercialmente (consulte a Tabela de Materiais).
    1. Para preparar a mistura enzimática....

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Resultados

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Figura 1: Imagens das lesões desmielinizantes focais marcadas pelo corante vermelho neutro.

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Figura 2: Imagens das três camadas formadas por centrifugação. As duas camadas superiores (camada 1 + camada 2) devem ser removidas no processo de remoção de de.......

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Divulgações

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Não há conflitos de interesse declarados.

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo
NomeEmpresaNúmero de catálogoComentários
Tubos de microcentrífuga de 1,5 mLBIOFILCFT001015
Tubos de centrífuga de 15 mLBIOFILCFT011150
Tubos de centrífuga de 50 mLBIOFILCFT011500
Filtro de 70 μmMiltenyi Biotec130-095-823
Kit de dissociação cerebral para adultos, camundongo e ratoMiltenyi BiotecTelefone: 130-107-677
Ratos C57BL/6JLaboratórios SJA
CD11b (Microglia) Grânulos, humanos e de camundongoMiltenyi Biotec130-093-634
Soro fetal bovinoBOSTERPYG0001
MACS MultiStandMiltenyi Biotec130-042-303
Separador MiniMACSMiltenyi Biotec130-042-102
Colunas MSMiltenyi Biotec130-042-201
Vermelho NeutroSigma-Aldrich1013690025
PbsBOSTERPYG0021
PentobarbitalSigma-AldrichPág. P-010
EstereomicroscópioMshOtMZ62

Reimpressões e permissões

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Etiquetas

Microglia IsolationMagnetic Activated Cell SortingCD11b Magnetic BeadsDemyelinating LesionsMouse Brain TissueTissue DigestionDensity Gradient CentrifugationCell Suspension FiltrationMagnetic Column SeparationPrimary Microglia

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