Isolamento de vários tipos de células de um cérebro de camundongo por homogeneização mecânica

Abstract

Fonte: Molina Estevez, F. J., et al. Caracterização Citométrica de Fluxo Simultânea de Múltiplos Tipos de Células Recuperadas do Cérebro/Medula Espinhal de Camundongos Através de Diferentes Métodos de Homogeneização. J. Vis. Exp. (2019).

Este vídeo demonstra o isolamento de vários tipos de células do tecido cerebral de camundongos. O tecido é primeiro cortado mecanicamente usando um moedor de tecido em uma solução salina para manter um equilíbrio osmótico. O homogeneizado tecidual é então submetido à centrifugação por gradiente de densidade para remover os detritos celulares. As células são então ressuspensas em uma solução para análise posterior.

Protocol

Isenção de responsabilidade: Todos os procedimentos que envolvem a coleta de amostras foram realizados de acordo com as diretrizes do IRB do instituto.

1. Homogeneização mecânica do cérebro e da medula espinhal

NOTA: Os volumes descritos nesta seção são suficientes para a homogeneização de metade do cérebro ou da medula espinhal.

1. Pré-resfrie a argamassa de vidro do moedor de lenços Dounce (Tabela de Materiais) colocada no gelo.
2. Adicione 3 mL de solução salina balanceada 1x Hank's pré-resfriada (HBSS) à argamassa.
3. ....

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
10X HBSS (sem cálcio, cloreto de magnésio e sulfato de magnésio)	Gibco	14185-052
Filtro de células de 70 mm	Corning	431751
Tubos cônicos (15 mL)	CellTreat	229411
Tubos cônicos (50 mL)	CellTreat	229422
Conjunto de moedor de tecido Dounce (inclui almofariz e pilões A e B)	Sigma-Aldrich	D9063-1SET
Percoll	GE Saúde	10266569	vendido como reagente não estéril
Percoll	sigma	65455529	reagente estéril (a ser usado para aplicações que requerem esterilidade)
Percoll PLUS	sigma	GE17-5445-01	reagente contendo traços muito baixos de endotoxina