Artigo de método

Isolando células imunes de plexos coróides de camundongos

8 de julho de 2025

Neste artigo

Resumo

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Fonte: Dominguez-Belloso, et al. Isolamento e Caracterização das Células Imunes de Plexos Coróides de Camundongos Microdissecados. J. Vis. Exp. (2022)

Este vídeo demonstra o procedimento de isolamento de células imunes dos plexos coróides de camundongos. Este procedimento é usado na pesquisa de neuroimunologia para entender como as células imunes nos plexos coróides afetam a saúde do cérebro e várias doenças neurológicas.

Protocolo

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Todos os procedimentos envolvendo modelos animais foram revisados pelo comitê institucional local de cuidados com animais e pelo conselho de revisão veterinária JoVE.

1. Preparação dos materiais

  1. Tampão de classificação de células ativadas por magnetismo (MACS): Prepare 2 mM de ácido etilenodiaminotetracético (EDTA) e 0,5% de albumina de soro bovino (BSA) (Tabela de Materiais) em PBS-/-.
  2. Solução-mãe de colagenase IV (20 U/μL): Ressuspender o pó em PBS+/+ (Tabela de Materiais), alíquota e armazenar a -20 °C.
    nota: A colagenase IV requer que o MgCl....

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Divulgações

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Não há conflitos de interesse declarados.

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo
NomeEmpresaNúmero de catálogoComentários
anti-mouse CD16/CD32BD Biociências553142Anticorpo para citometria de fluxo
Albumina bovinaMP Biomédicos160069Reagente de bloqueio
APC anti-mouse CX3CR1BioLegend149008Anticorpo para citometria de fluxo
APC anti-mouse TCRbBioLegend109212Anticorpo para citometria de fluxo
APC-Cy7 anti-rato CD4BioLegend100414Anticorpo para citometria de fluxo
APC-Cy7 anti-rato IA-IEBioLegend107628Anticorpo para citometria de fluxo
BD FACSymphony A5 Cell AnalyzerBD BiociênciasAnalisador de citometria de fluxo
BV711 anti-mouse Ly6CBioLegend128037Anticorpo para citometria de fluxo
Colagenase IVGibco17104-019Enzima para dissociar o tecido CP
DAPIThermo CientíficoNº 62248Marcador vivo/morto
EdtaQuelante de íons
tesoura finaFesta14058-11Ferramenta de dissecação
anti-mouse FITC CD45BioLegend103108Anticorpo para citometria de fluxo
Inserção de infusão do controlador de fluxoFusão de CuidadosRG-3-CInserção de perfusão sanguínea
Software FlowJoBD BiociênciasSoftware de análise
fórcepsFesta11018-12Ferramenta de dissecação
heparinaSigma-AldrichH3149-10KUanticoagulante
ImalgeneBoehringer IngelheimCetamina anestésica
Contas eletrônicas OneCompInvitrogen01-1111-42Contas de controle para realizar a compensação
Pbs-/-Gibco14190-094buffer
PBS+/+Gibco14040-091buffer
anti-rato em PE CD8aBioLegend100708Anticorpo para citometria de fluxo
PE anti-mouse F4/80BioLegendRolamento 123110Anticorpo para citometria de fluxo
PE-Dazzle 594 anti-mouse CD11bBioLegend101256Anticorpo para citometria de fluxo
RompunBayerXilazina, anestésica
pinça finaBiologia Dumoxel11242-40Ferramenta de dissecação
VeterinárioCevaBuprenorfina analgésica

Reimpressões e permissões

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Etiquetas

Choroid Plexus IsolationImmune Cell IsolationMouse Brain DissectionTissue DigestionCollagenase IV TreatmentCell CentrifugationMACS Buffer WashFlow Cytometry AnalysisAntibody StainingChoroid Plexus Microdissection

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