Artigo de método

Diferenciando células-tronco pluripotentes induzidas por humanos em células endoteliais microvasculares cerebrais

8 de julho de 2025

Neste artigo

Resumo

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Fonte: Pong, S. et al., Derivação, Expansão, Criopreservação e Caracterização de Células Endoteliais Microvasculares Cerebrais de Células-Tronco Pluripotentes Induzidas por Humanos. J. Vis. Exp. (2020)

Este vídeo demonstra um processo de várias etapas para diferenciar iPSCs humanas em células endoteliais microvasculares cerebrais. As células diferenciadas resultantes imitam de perto as células endoteliais microvasculares cerebrais, caracterizadas por junções apertadas, tornando-as ideais para pesquisas sobre doenças cerebrais.

Protocolo

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Todos os procedimentos que envolvem coleta de amostras foram realizados de acordo com as diretrizes do IRB do instituto.

NOTA: Resumidamente, os fibroblastos foram reprogramados para iPSC por meio de reprogramação genética baseada em mRNA. As iPSCs foram mantidas em meio de células-tronco (SCM) (ver lista de materiais) e armazenadas a uma densidade de ~ 1,2 x 102 células / mL com 1 mL de SCM, 10 μM com inibidor de proteína quinase associado a rho (ROCKi) Y-27632 e 10% (v / v) de sulfeto de dimetila (DMSO), em frascos criopreservados em nitrogênio líquido a -160 ° C. Todos os procedimentos a seguir são realizados ....

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Divulgações

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Não há conflitos de interesse declarados.

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo
NomeEmpresaNúmero de catálogoComentários
AccutaseSigma AldrichA6964-100mL
Suplemento B27Thermo Fisher Científico17504044
Colágeno IV da placenta humanaSigma AldrichC5533-5mg
Frasco Criogênico de Polipropileno com Rosca Interna Corning 2 mLCorning8670
Placas de Cultura de Células de Fundo Plano Corning Costar (6 poços)Corning353046
DMEM/F12 (sem vermelho de fenol)Thermo Fisher CientíficoA1413202
DmsoSigma AldrichD2438-50mL
DPBS (+/+)Gibco / Thermo Fisher Scientific14040-117
Essencial 6 Médio (Thermo Fisher)Thermo Fisher CientíficoA1516401
FibronectinaSigma AldrichF2006-2mg
Geltrex LDEV-Free Fator de Crescimento Reduzido Matriz de Membrana BasalThermo Fisher CientíficoA1413202
Solução salina Hanks' Balance com cálcio e magnésioThermo Fisher CientíficoRolamento 24020-117
Meio sem soro endotelial humanoThermo Fisher Científico11111044
Contador de células automatizado Invitrogen CountessThermo Fisher CientíficoN/A
Ácido retinóicoSigma AldrichR2625-100MG
Cloridrato de Y-27632 (inibidor de ROCK)Tocris/Thermo Fisher Scientific1254
Mancha azul de tripano (0,4%) para uso com o contador de células automatizado CountessThermo Fisher CientíficoT10282

Reimpressões e permissões

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Etiquetas

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