Artigo de método

Gravações de Patch-Clamp do Dendrito de um Neurônio Dopaminérgico em uma Fatia de Cérebro

8 de julho de 2025

Neste artigo

Resumo

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Fonte: Engel, D. Gravações subcelulares de patch-clamp do domínio somatodendrítico de neurônios dopaminérgicos nigral. J. Vis. Exp. (2016).

Este vídeo demonstra uma técnica para gravação de patch-clamp da superfície da membrana dendrítica. Isso ajuda a examinar diretamente as propriedades elétricas dos dendritos e dos canais iônicos dependentes de voltagem subjacentes em neurônios dopaminérgicos.

Protocolo

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Todos os procedimentos envolvendo modelos animais foram revisados pelo comitê institucional local de cuidados com animais e pelo conselho de revisão veterinária JoVE.

1. Preparação das Soluções

  1. O líquido cefalorraquidiano artificial padrão (ACSF; Tabela 1)
    1. Use sais de alta pureza e copos de vidro limpos previamente enxaguados com água bidestilada para preparar uma solução fresca. Use água bidestilada de alta qualidade para a preparação de todas as soluções extracelulares e intracelulares.
    2. De acordo com a Tabela 1, pegue um béquer de 2 L para dissolver o NaHCO3 e....

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Resultados

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Tabela 1: Líquido cefalorraquidiano artificial (FCSCA)

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substânciag/molconcentraçãopara 1 L
NaCl58.443125 mM7.305 gramas
NaHCO384.00725 mM2.100 gramas
Kcl74.551

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Divulgações

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Não há conflitos de interesse declarados.

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo
NomeEmpresaNúmero de catálogoComentários
Água bidestiladaMilliporeSuper QResistividade >14 MΩ cm, ideal 18,2 MΩ cm a 25°C, filtrada (0,22 μm), https://www.merckmillipore.com/BE/en/product/Super-Q-Plus-Water-Purification-System,MM_NF-C1760
Velas de microfiltroRobuPorosidade 3, 6 mm ou 13 mm de diâmetro
Fatiador de tecidos com vibrosondaLeicaVT1200Parâmetros de corte: velocidade 0,07, amplitude 1,40
Fatiador de lençosDosakaDTK-1000Parâmetros de corte: velocidade 4, frequência 7
LâminasGiletteSuper Prata
Ferramentas de dissecaçãoBraun, Aesculap
Secção de reservasob medida
Beckers PPVWRTelefone: 213-1725400 ml
Filtro de seringaMerk MilliporeMillex - GV 0,22 μm
Cola de cianoacrilatoUHU"Sekunden Kleber"cola líquida
Câmara de gravaçãoLuigs & NeumannMini câmara de fatia
Extrator de pipetas horizontalInstrumentos SutterP-97 marrom-flamejante
PipetasHilgenberg18075242 mm o.d./1 mm i.d. vidro capilaries, extremidades polidas a fogo, lavadas
Cera dentalColtène/Whaledenttiras de cera de bandeja ortodôntica
Grade de platinapara ancorar fatias na câmara de gravação, feitas sob medida com um disco de platina
MicroforjaNarishigeMF-830para polir pontas de pipeta
Sulfato de metilo de potássioMP Biomédicos215481
BiocitinaSondas molecularesB1592
manómetroGREISINGER eletrônicoGDH 13 AN
microscópioZeissFs
Contraste de gradiente DodtLuigs & Neumann
ManipuladoresLuigs & NeumannLN Mini 25
Captura de quadrosA fonte de imagemDFG/USB2pro
câmeraDAGE-MTINC-70
condensadorZeissCondensador de alta abertura numérica trabalhando com óleo
objetivoZeissW Plano Apocromático 441470-9900 VIS-IRAmpliação de 63x, longa distância, alta abertura numérica Objetiva de imersão em água 1.0
Trocador quádruploLuigs & Neumannentre a câmera e o microscópio
Monitor de vídeo preto e brancoSonySSM-175CE16 polegadas, 850 linhas de TV, analógico
Frascos de amostra, vidro âmbar, com tampaVWR215-2409Para transferir fatias da configuração para a sala de histologia
O Guia do AxônioDispositivos Moleculareslivro
Paraformaldeídosigma441244consulte a FICHA DE DADOS DE SEGURANÇA e a Diretiva de Substâncias Perigosas (UE) antes de usar
Placa de cultura de células de poçoGreiner-Bio-OneNº 662160para a coloração de fatias fixas
Tritão X-100Merk108643consulte a FICHA DE DADOS DE SEGURANÇA e a Diretiva de Substâncias Perigosas (UE) antes de usar
ProLong Diamond AntifadeSondas Moleculares - Thermo Fisher ScientificPág. 36961

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