Artigo de método

A contração da artéria mesentérica e Estudos Relaxamento Usando Miografia Fio Automated

DOI:

10.3791/3119

22 de setembro de 2011

Neste artigo

Resumo

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Um método automatizado para medições Miografia vigor em artérias mesentéricas isoladas é descrito. Ele emprega um Mulvany-Halpern Auto Myograph fio duplo 510A para determinar as respostas à fenilefrina e cálcio extracelular. O método permite a determinação consistente de respostas isométrica aos agonistas em pequenos vasos de diâmetros de 60 - 300 mm, de forma independente.

Resumo

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Vasos de resistência proximal, tais como as artérias mesentéricas, contribuem substancialmente para a resistência periférica. Esses pequenos vasos entre 100-400 mM em função de diâmetro principalmente no direcionamento do fluxo de sangue para vários órgãos de acordo com os requisitos gerais do corpo. A artéria mesentérica de ratos tem um diâmetro superior a 100 mm. A técnica Miografia, primeiramente descrita por Mulvay e Halpern 1, foi baseada no método proposto por Bevan e Osher 2. A técnica fornece informações sobre navios de pequeno porte em condições isométricas, onde o encurtamento substancial da preparação muscular é impedida. Desde produção de força e sensibilidade de navios para diferentes agonistas é dependente da extensão do trecho, de acordo com a relação tensão-comprimento ativo, é essencial a realização de estudos de contração isométrica em condições para impedir o cumprimento dos fios de montagem. Fios de aço inoxidável são preferíveis aos fios de tungstênio por causa da oxidação deste último, que afeta as respostas registradas 3. A técnica permite a comparação de agonista-induzida contrações dos vasos montados para obter provas para a função normal de receptores vascular das células musculares lisas.

Temos demonstrado em vários estudos que artérias mesentéricas isoladas que são contratados com phenylyephrine relaxar com a adição de concentrações cumulativas de cálcio extracelular (Ca 2 + e). As descobertas levaram-nos a concluir que os nervos sensoriais perivascular, que expressam a proteína G acoplada Ca 2 + receptor-sensing (CaR), mediar esta resposta vasorelaxamento. Utilizando um método automatizado Miografia fio, mostramos aqui que artérias mesentéricas de Wistar, Dahl sensíveis ao sal (DS) e Dahl sal-resistentes (DR) ratos respondem diferentemente ao Ca 2 + e. Tecidos de ratos Wistar mostrou Ca 2 + maior sensibilidade em comparação com os de DR e DS. CaR expressão reduzida em artérias mesentéricas de ratos DS correlaciona-se com Ca 2 + reduzida de relaxamento e-induzida de isoladas, pré-contraídos artérias. Os dados sugerem que o carro é necessário para o relaxamento das artérias mesentérica sob tônus ​​adrenérgico aumentado, como ocorre na hipertensão, e indicar um defeito inerente na via de sinalização CaR em animais Dahl, que é muito mais grave no DS.

O método é útil para determinar a reatividade vascular ex vivo nas artérias mesentéricas de resistência e similares pequenos vasos sanguíneos e comparações entre diferentes agonistas e / ou antagonistas podem ser facilmente e constantemente avaliada lado a lado 6,7,8.

Protocolo

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1. Isolamento da artéria mesentérica de ratos pequenos

  1. Anestesiar animais com isoflurano em uma câmara fechada e limpe o abdômen com álcool.
  2. Realizar uma laparotomia na linha média para expor cama mesentérica.
  3. Com uma tesoura, retire cerca de 85 cm de intestino com a alimentação vasculatura com a artéria mesentérica superior. Corte a extremidade proximal da seção intestinal perto do piloro e da extremidade distal perto da junção íleo-coecal. Segmentos do intestino são isolados de ratos que estão profundamente anestesiados com isoflurano e submetidos à eutanásia por open-peito punção cardíaca.
  4. Colocado seção extirpado numa plac....

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Discussão

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A hipertensão é uma das principais causas de morbidade cardiovascular, renal e cerebral / mortalidade. A ocorrência de hipertensão é alta na população e hipertensão sal-sensível é particularmente elevada na população idosa, e mais prevalente em negros do que brancos. Este é acreditado para ser devido à tendência dos negros para reter sódio em seus rins 9. Sal-sensibilidade é um fator importante que contribui para a doença renal e está associada à disfunção endotelial, mas o mecanismo não é totalmente compreen.......

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Divulgações

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Não há conflitos de interesse declarados.

Agradecimentos

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O projeto descrito foi apoiada por números Award HL064761 R01, R25 HL059868, 1SC1 HL099139 e P20 MD000175 forma National Institutes of Health. O conteúdo é da exclusiva responsabilidade dos autores e não representam, necessariamente, a posição oficial do National Institutes of Health.

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Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo
NomeEmpresaNúmero de catálogoComentários
Nome de equipamentos / reagentes Companhia Número de catálogo Comentários (opcional)
Auto Myograph fio duplo System-510A DMT-EUA, Inc. Atlanta, GA. 100151
PowerLab/4SP Sistema de Aquisição de Dados ADInstruments, Colorado Springs, CO ML750 Novos modelos com 4-16 canais de entrada estão disponíveis.
Dell Dimension XPS Gen 4 Computador Dell
Stemi SV II (Apo) microscópio de dissecção com Ocular Carl Zeiss International.
Wistar, Dahl sensíveis ao sal, Dahl sal-resistentes ratos Harlan Sprague Dawley, Indianapolis, IN.
Para roedores Harland Tekland, Madison, WI.
Fenilefrina Sigma-Aldrich, St. Louis, MO.
Outros produtos químicos Todos os produtos químicos utilizados foram da mais pura notas disponíveis comercialmente.

Referências

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  1. Mulvany, M. J., Halpern, W. Mechanical properties of vascular smooth muscle cells in situ. Nature. 260, 617-619 (1976).
  2. Bevan, J. A., Osher, J. V. A direct method for recording tension changes in the wall of small blood vessels in vitro. Agents Actions.

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