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Avaliação baseada em matriz de microeletrodos de redes neuronais em fatias da medula espinhal de camundongos

July 8th, 2025

In This Article

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Fonte: Iredale, J. A., et al. Registrando a atividade da rede em circuitos nociceptivos espinhais usando matrizes de microeletrodos. J. Vis. Exp. (2022).

Este vídeo demonstra um ensaio baseado em matriz de microeletrodos para estudar a atividade da rede neuronal em seções da medula espinhal de camundongos. Primeiro, a atividade eletrofisiológica do corno dorsal superficial (SDH) do corte é registrada. Em seguida, um inibidor do canal de potássio é introduzido para prolongar a despolarização, resultando em atividade rítmica síncrona em toda a rede neuronal.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Todos os procedimentos que envolvem coleta de amostras foram realizados de acordo com as diretrizes do IRB do instituto.

1. Eletrofisiologia in vitro

  1. Preparação de soluções para preparação e registro de fatias da medula espinhal
    1. Líquido cefalorraquidiano artificial
      nota: O líquido cefalorraquidiano artificial (aCSF) é usado em uma câmara de incubação de interface, onde as fatias são armazenadas até o início do registro e durante os experimentos como perfusato e diluente para drogas. Consulte a Tabela 1 para a composição detalhada.
    2. ....

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Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

figure-results-1
Figura 1: Orientações de corte da medula espinhal, métodos de montagem e corte. (A) As fatias transversais requerem um bloco de corte de isopor com uma ranhura de suporte cortada nele. A medula espinhal é apoiada contra o bloco na ranhura de suporte, o lado dorsal da medula voltado para longe do bloco. O bloco e o cordão são colados em um estágio de corte com adesivo de cianoacrilato.......

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Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
Não há conflitos de interesse declarados.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
4-aminopiridinaSigma-Aldrich275875-5G
100% etanolThermo FisherAJA214-2.5LPL
CaCl2 1MBanksia Científica0430/1L
Carbonox (Carbogen - 95% O2, 5% CO2)Coregas219122
Tesoura de mola de cabo longo curvoFerramentas de Belas Ciências15015-11
Câmara de incubação de interface de ar feita sob medida
Soro fetal bovinoThermo Fisher10091130
Fórceps Dumont #5Ferramentas de Belas Ciências11251-30
glicoseThermo FisherAJA783-500G
Soro de cavaloThermo Fisher16050130
Microscópio invertidoZeissAxiovert10
KclThermo FisherAJA383-500G
CetaminaCevaKETALAB04
Tesoura cirúrgica grandeFerramentas de Belas Ciências14007-14
Adesivo Instantâneo Loctite 454Parafusos e suprimentos industriaisL4543G
LABORATÓRIO MATLABObras de MatemáticaR2018b
MEAs, tridimensionaisSistemas Multicanal60-3DMEA100/12/40iR-Ti, 60-3DMEA200/12/50iR-Ti60 eléctrodos de nitreto de titânio (TiN) com 1 eléctrodo de referência interno, organizados numa grelha quadrada de 8x8. Os eletrodos têm 12 μm de diâmetro, 40 μm (100/12/40) ou 50 μm (200/12/50) de altura e espaçados equidistantes de 100 μm (100/12/40) ou 200 μm (200/12/50) de distância.
Headstage MEASistemas MulticanalMEA2100-HS60
Placa de interface MEASistemas MulticanalMCS-IFB 3.0 Inicialização múltipla
Rede MEASistemas MulticanalALA HSG-MEA-5BD
Sistema de perfusão MEASistemas MulticanalPPS2
MEAs, PlanarSistemas Multicanal60MEA200/30iR-Ti, 60MEA500/30iR-Ti60 eléctrodos de nitreto de titânio (TiN) com 1 eléctrodo de referência interno, organizados numa grelha quadrada de 8x8 (200/30) ou numa grelha rectangular de 6x10 (500/30). Os eletrodos têm 30 μm de diâmetro e espaçamento equidistante de 200 μm (200/30) ou 500 μm (500/30) de distância.
MgCl2Thermo FisherAJA296-500G
Câmera para microscópioMoticoMoticam X Wi-Fi
Software do Analisador MulticanalSistemas MulticanalV 2.17.4
Software Multi Channel ExperimenterSistemas MulticanalV 2.17.4
NaClThermo FisherAJA465-500G
NaHCO3Thermo FisherAJA475-500G
NaH2PO4Thermo FisherACR207805000
RongeursFerramentas de Belas Ciências16021-14
Tesoura de mola pequenaFerramentas de Belas CiênciasRolamento 91500-09
Tesoura cirúrgica pequenaFerramentas de Belas Ciências14060-09
sacaroseThermo FisherAJA530-500G
Supercolaadesivo de cianoacrilato
TetrodotoxinaAbcamAB120055
Tabela de isolamento de vibraçãoNewportVH3048W-OPT
Micrótomo vibratórioLeicaVT1200 S

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Microelectrode ArrayNeuronal NetworkMouse Spinal CordSuperficial Dorsal HornPotassium Channel Inhibitor4 AminopyridineAction Potential RecordingElectrophysiological ActivitySynchronous Rhythmic ActivityArtificial CSF Perfusion

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