Manipulação seletiva de oscilações em um modelo de camundongo

Resumo

Fonte: Bender, F. et al., Arrastamento optogenético de oscilações do hipocampo em camundongos que se comportam. J. Vis. Exp (2018)

Este vídeo demonstra um protocolo para modular as oscilações em um modelo de camundongo geneticamente modificado com canais iônicos sensíveis à luz em seus neurônios do septo medial GABAérgico. Ao fornecer pulsos de luz ao hipocampo, o protocolo visa sincronizar a atividade neuronal e gerar oscilações, que são registradas como potenciais de campo locais.

Protocolo

Todos os procedimentos envolvendo modelos animais foram revisados pelo comitê institucional local de cuidados com animais e pelo conselho de revisão veterinária JoVE.

PV-Cre knock-in camundongos machos, de 10 a 25 semanas de idade, foram usados. Os camundongos foram alojados em condições padrão no biotério e mantidos em um ciclo de 12 claros / escuros.

1. Preparação de matrizes de fios de tungstênio para gravações LFP

1. Cole uma fibra óptica na matriz de fios para que a ponta da fibra fique no nível do fio mais curto e a ponta da fibra fique próxima, mas sem tocar nos fios de tungstênio. Mantenha o ângulo da fibra o menor possível para evitar danos aos tecidos durante a implantação.

2. Estimulação Optogenética e Aquisição de Dados Eletrofisiológicos

1. Verifique a saída de luz do cabo de conexão. Estime a saída de luz da ponta da fibra após a conexão, dependendo da taxa de transmissão da fibra implantada. Certifique-se de que a saída de luz da ponta da fibra esteja entre 5-15 mW para permitir um arrastamento confiável.
2. Conecte o headstage préamplifier ao conector cronicamente implantado. Conecte o patch cord de fibra óptica à fibra hipocampal cronicamente implantada para experimentos de estimulação optogenética. Em experimentos de estimulação de luz de controle, a fibra óptica é conectada a uma ponteira fictícia conectada ao fone de ouvido.
3. Coloque o mouse na câmara de gravação.
4. Abra o software para controlar o gerador de estímulos para gerar o protocolo de estimulação.
5. Selecione o canal que controla o laser DPSS de 473 nm.
6. Abra o software do sistema de gravação. Clique em "ACQ" para adquirir e "REC" para gravar. Aguarde antes do início da estimulação luminosa para registrar o comportamento da linha de base (por exemplo, 2 min para recuperar a velocidade da linha de base ou 30 min para extrair os campos de local da linha de base).
7. Abra o software para controlar o gerador de estímulos. Clique em "Arquivo > Abrir" e selecione o arquivo de protocolo de sua escolha. Clique em "Baixar e iniciar" para iniciar a estimulação da luz.

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Ratos PV-Cre	O Laboratório Jackson	B6; 129P2-Pvalbtm1(cre)Arbr/J
Laser DPSS de 473 nm	Laserglow Technologies, Toronto, ON, Canadá	R471005FX	Série LRS-0473
Laser DPSS de 593 nm	Tecnologias Laserglow	R591005FX	Série LRS-0594
MC_Stimulus II	Sistemas Multicanal, Reutlingen, Alemanha	STG 4004
Fios de tungstênio	California Fine Wire Company, Grover Beach, CA, EUA	CFW0010954	40 μm, 99,95%
Palco	Neuralynx, Bozeman, Montana, EUA	HS-8	Pré-amplificadores de ganho de unidade de headstage em miniatura
LED	Neuralynx	HS-LED-Vermelho-omni-10V
LABORATÓRIO MATLAB	Mathworks, Natick, MA, EUA
MC_Stimulus software	Multicanal, Sistemas
Fibra óptica multimodo	ThorLabs, Dachau, Alemanha	FG105LCA	0,22 NA, Low-OH, Ø105 μm Core, 400 - 2400 nm
Acoplador de fibra óptica multimodo	Thorlabs	FCMM50-50A-FC	Acoplador 1x2 MM, taxa de divisão 50:50, fibras GI de 50 μm, FC/PC