Registrando as respostas auditivas do tronco encefálico em um filhote de rato

Neste artigo

Resumo

Fonte: Chang, A. et al., Resposta auditiva do tronco encefálico e registro de grampo de remendo de células ciliadas externas em ratos pós-natais. J. Vis. Exp. (2018).

Este vídeo demonstra um método para registrar as respostas auditivas do tronco encefálico (ABRs) de filhotes de ratos. Ele descreve as etapas para colocação de eletrodos, aplicação de estímulo sonoro e análise de processamento de sinal no tronco encefálico para avaliar as respostas neurais.

Protocolo

Todos os procedimentos envolvendo modelos animais foram revisados pelo comitê institucional local de cuidados com animais e pelo conselho de revisão veterinária JoVE.

1. Gravação da Resposta Auditiva do Tronco Encefálico (ABR)

Anestesiar ratos Sprague Dawley (SD) (filhotes de 1 a 14 dias e adultos de 2 meses, ambos os sexos) com uma única injeção de pentobarbital sódico a 1,5% (22 mg/kg para filhotes e 30 mg/kg para adultos, intraperitoneal (i.p.).
Coloque o animal anestesiado em um molde de espuma de polietileno para imobilizar o corpo do animal. Coloque o animal em uma mesa antivibração em uma sala de atenuação de som. Mantenha a temperatura corporal do animal em 37,5 °C com uma almofada de aquecimento.
Limpe a área da cabeça com etanol 70% (vol/vol). Usando uma tesoura fina, faça uma incisão de 1-2 mm ventrolateral ao pavilhão auricular externo para colocar o eletrodo de referência ou terra. Um eletrodo de agulha subdérmica (eletrodo de registro) está localizado sobre o vértice do crânio (Figura 1A).
Usando o gerador de funções, gere rajadas de tom calibradas (subida/descida de 1 ms, platô de 3 ms) de várias frequências (2, 4, 8, 16, 24 e 32 kHz) e intensidades (diminuídas de 85 para 10 dB SPL em um passo de 5 dB). Varie a frequência e a amplitude manualmente ou usando um computador. Forneça estímulos sonoros através de um alto-falante eletrostático localizado a 10 cm de distância em direção à cabeça do animal.
Filtre (100-1.000 Hz), amplifique e calcule a média (256 vezes) do potencial de som obtido usando um processador multifuncional para obter os ABRs. Os traços ABR são monitorados online e armazenados para análise offline. Demora cerca de 40 min para completar o registro do PEATE de um animal.
nota: Normalmente, podem ser identificados de três a sete picos (onda I a VII) com latências inferiores a 15 ms (Figura 1B). O limiar ABR é definido como o nível sonoro mínimo no qual as ondas I e II podem ser detectadas.
Eutanasiar antes que os animais acordem da anestesia (com uma injeção intraperitoneal de 0,3 mL de pentobarbital sódico a 1,5%).

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Resultados

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Figura 1. Registro da resposta auditiva do tronco encefálico. (A) O eletrodo de registro foi inserido no couro cabeludo entre duas orelhas. Os eletrodos terra e de referência foram colocados sob o pavilhão auricular esquerdo e direito, respectivamente. Um alto-falante de campo aberto foi colocado a 10 cm de distância da ponta nasal do rato. (B) Duas formas de onda AB...