Registro da atividade nervosa aferente mesentérica em um segmento de jejuno de camundongo ex vivo

Resumo

Fonte: Nullens, S., et al. Registro in vitro da atividade nervosa aferente mesentérica em segmentos jejunais e colônicos de camundongos. (2016).

Este vídeo mostra o processo de gravação de sinais elétricos dos nervos aferentes mesentéricos em um segmento jejunal de camundongo dissecado para estudar os efeitos da pressão tecidual e das mudanças de movimento na atividade nervosa aferente.

Protocolo

Todos os procedimentos envolvendo modelos animais foram revisados pelo comitê institucional local de cuidados com animais e pelo conselho de revisão veterinária JoVE.

1. Preparação do nervo aferente jejunal

1. Realizar a eutanásia de roedores do roedor adolescente ou adulto que tenha sido aprovado antes do experimento pelo Comitê de Ética local (por exemplo, sedação terminal seguida de punção cardíaca, luxação cervical, etc.).
   nota: Usamos a luxação cervical para sacrificar os animais, resultando em experimentos sem a necessidade de anestesia adicional ou cuidados pós-cirúr....

Resultados

Figura 1: Visão geral esquemática da câmara de gravação e do eletrodo de sucção construídos para esse fim. Visão geral detalhada da configuração técnica com o eletrodo de sucção e a câmara de gravação instalada.

Figura 2: Rastreamento representativo do registro.......

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Cloreto de sódio (NaCl)	Produtos químicos da VWR	2,78,10,295	solução composta de Krebs
Cloreto de potássio (KCl)	Acros orgânicos	196770010	solução composta de Krebs
Dihidrogenofosfato de sódio (NaH2PO4)	Produtos químicos da VWR	1,06,34,61,000	solução composta de Krebs
Bicarbonato de sódio (NaHCO3)	Merck	1,06,32,91,000	solução composta de Krebs
Sulfato de magnésio (MgSO4)	Merck	1,05,88,61,000	solução composta de Krebs
Cloreto de cálcio (CaCl2)	Merck	2,38,11,000	solução composta de Krebs
D-glicose	Produtos químicos da VWR	1011175P	solução composta de Krebs
água destilada			solução composta de Krebs
Tubulação de PVC	Suprimentos de Laboratório Científico		O segmento intestinal deve ser montado sobre tubos de PVC
Tubos de silicone	Suprimentos de Laboratório Científico		O resto da tubulação, idealmente à base de silicone - desalojamento mais fácil de detritos na tubulação
Fio de seda	Pearsall Limitada	10B15S220	Fixação do segmento sobre a tubulação de PVC
Driver de seringa	Aparelho de Harvard	Telefone: 55-2222	Infusão intraluminal de Krebs
Binóculo - incluindo ampliação de 10x no oculair	Zeiss STEMI 2000		Visualização ideal para a dissecção do nervo aferente
Unidade de controle de manta homeotérmica	Aparelho de Harvard	507214	Aquecimento da câmara do órgão
Banho de órgão feito sob medida com fundo coberto de Sylgard
Software Spike2			Registro e análise dos dados
Alfinetes para insetos, 500 peças, aço inoxidável, diâmetro 0,2 mm	O inseto de Austerlitz fixa minutiens		Dissecção do nervo aferente
Pinça Dumont #5 inox 11cm	Instrumento de precisão mundial	500341	Dissecção do nervo aferente
Tesoura, mola, 14 cm	Instrumento de precisão mundial	15905	Dissecção do nervo aferente
DB digitimer	NL 108T2/10		Transdutor de pressão
Micromanipulador	Narishige	M-3333	Manipulação 3D do eletrodo de sucção
Micromanipulador	Bloco rotativo X-4		Manipulação 3D do eletrodo de sucção
Micromanipulador	Suporte magnético GJ-8		Manipulação 3D do eletrodo de sucção
Fonte de luz	Microscópios Euromex Holland EK-1		Visualização ideal para a dissecção do nervo aferente
Aparelho de Gravação CED 1401			Registro da atividade nervosa aferente
Eliminador de ruído Humbug 50/60Hz	Quest Scientific Instruments		Eliminação do ruído de fundo
Bomba de infusão	Gibson Minipuls 2		Infusão da câmara do órgão na qual o segmento é montado
Suporte de Microeletrodo Meias Células 1,5 mm	Instrumento de precisão mundial	MEH2SW	Eletrodo de sucção para isolamento da fibra aferente
Capilares de vidro borossilicato, 300 peças; 1,5/0,84 OD/ID	Instrumento de precisão mundial	1B150-4	Capilar para o isolamento do nervo aferente