Monitorando o córtex cerebral com uma matriz de vários eletrodos em resposta a agentes indutores de convulsões

Abstract

Fonte: Lu, H. C., et al. Estimulação por corrente contínua e registro de matriz de múltiplos eletrodos da atividade semelhante a convulsões na preparação de fatias cerebrais de camundongos. J. Vis. Exp. (2016).

Neste vídeo, são investigados os efeitos da estimulação transcraniana por corrente contínua (ETCC) em fatias cerebrais contendo o córtex cingulado anterior (ACC) e as regiões do tálamo, usando um arranjo de múltiplos eletrodos (MEA) para medir sinais elétricos. Ao fornecer pulsos elétricos e infundir drogas indutoras de convulsões, o estudo investiga a resposta do ACC às convulsões.

Protocol

Todos os procedimentos envolvendo amostras de animais foram revisados e aprovados pelo comitê de revisão ética animal apropriado.

1. Preparando Solução Experimental e Equipamento para Gravação MEA (Multielectrode Array)

1. Prepare o líquido cefalorraquidiano artificial (aCSF; 124 mM NaCl, 4,4 mM KCl, 1 mM NaH₂PO₃, 2 mM MgSO₄, 2 mM CaCl₂, 25 mM NaHCO₃ e 10 mM de glicose, borbulhado com 95% de O₂ e 5% de CO₂).
2. Use dois tipos de sondas MEA: 6 x 10 MEA planar e 8 x 8 MEA. A primeira sonda cobre a região que compreende o córtex, o est....

Results

Figura 1: Preparação da configuração do sistema de corte de talamocingulato e gravação MEA. (A) Procedimento de corte MT-ACC (a) Remova o cérebro e (b) transfira para aCSF oxigenado frio. (c) Faça dois cortes parassais (d) Vista lateral da parte medial do bloqueio cerebral. (e) Faça dois cortes ventrais angulares do bloco cerebral. (f) Cole o bloco cerebral em uma placa de plástico angular. (g) Faça .......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Isoflurano	Corporação de Produtos Halocarbon	NDC 12164-002-25	4% de sucesso
aCSF (total: 1 L):
D(+)-glicose	Merck	Rolamento 1.08337.1000	10 mM
Hidrogenocarbonato de sódio	Merck	Rolamento 1.06329.0500	25 mM
cloreto de sódio	Merck	Rolamento 1.06404.1000	124 mM
(+) -L-ascorbato de sódio, > = 98%	sigma	A4034-100G	0,15 g/2 c.c
Sulfato de magnésio anidro ReagentPlus	sigma	M7506-500G	2 mM
Cloreto de cálcio di-hidratado	Merck	Rolamento 1.02382.1000	2 mM
Di-hidrogenofosfato de sódio mono-hidratado	Merck	1.06346.1000	1 mM
Cloreto de potássio	May & Baker Ltd Dagenham Inglaterra	EM 7616	4,4 mM
(+)-Bicuculline	TOCRIS	130	5 μM em aCSF
4-Aminopiridina	TOCRIS	940	250 μM em aCSF
Vibratomo	Vibratomo	Série 1000	Corte em bloco em fatias de 500 μm de espessura
Sondas de matriz de multieletrodos (MEA): 6 x 10 MEA planares	Sistemas multicanal	60MEA500/30iR-Ti-pr MEAS 6x10	diâmetro do eletrodo, 30 μm; espaçamento entre eletrodos, 500 μm; impedância, 50 kΩ a 200 Hz
Sondas de matriz de múltiplos eletrodos (MEA): 8 x 8 MEA	Ayanda Biosystems	60MEA200/10iR-Ti-pr MEAS 8x8	eletrodo piramidal; diâmetro, 40 μm; altura da ponta, 50 μm; espaçamento entre eletrodos, 200 μm; impedância, 1.000 kΩ a 200 Hz
Um amplificador de 60 canais foi usado com um filtro passa-banda definido entre 0,1 Hz e 3 KHz na amplificação de 1.200X	Sistemas multicanal	MEA-1060-BC
Software MC Rack a uma taxa de amostragem de 10 KHz	Sistemas multicanal		Software para coleta e gravação de dados
Controle de um gerador de pulsos	Sistemas multicanal	STG 1002
Kits de ancoragem e fixações Slice	Warner Instruments	SHD-26H/10; WI64-0250
Bomba peristáltica-minipuls3	Gilsom	MINIPULS3	Taxa de perfusão: 8 ml/min
Estimulador isolado	Sistemas A-M	Modelo 2100	intensidade de ±350 μA, duração de 200 μseg
Eletrodo de tungstênio	Sistemas A-M	Rolamento 575300	colocado no tálamo