Injeção intravítrea para o Estabelecimento de Modelo de Doenças Ocular

Resumo

Injeção intravítrea é uma técnica amplamente utilizada na pesquisa em ciências visuais para doenças oculares ou como a aplicação direta do tratamento local. Este vídeo demonstra um protocolo para a injeção intravítrea usando uma seringa de 1ml com vidro pipeta. Dicas úteis sobre como evitar sangramento maciço e danos lentes são dadas.

Resumo

Injeção intravítrea é uma técnica amplamente utilizada na pesquisa em ciências visuais. Ele pode ser usado para estabelecer modelos animais com doenças oculares ou como a aplicação direta do tratamento local. Este vídeo apresenta como usar ferramentas simples e baratas para terminar o procedimento de injeção intravítrea. Uso de uma seringa de 1 ml, em vez de uma seringa hemilton, é usado. Dicas práticas de como fazer agulhas de injeção apropriada usando pipetas de vidro com pontas perfeitas, e como facilmente se conectar a agulha da seringa com a pipeta de vidro bem juntos, são dadas.

Para realizar uma boa injeção intravítrea, há três aspectos a serem observados: 1) no local da injecção não deve atrapalhar estrutura retina; 2) sangramento devem ser evitados para reduzir o risco de infecção; 3) lente deve ser intocável para evitar a catarata traumática. Em resumo, o ponto mais importante é reduzir a interrupção da estrutura ocular normal. Para evitar a interrupção da retina, a região nasal superior do olho de rato foi escolhido. Além disso, o ponto de punção da agulha estava no planar par, que foi cerca de 1,5 mm do limbo na região do olho de rato. Uma pequena quantidade de vítreo é delicadamente empurrado para fora através do orifício da punção para reduzir a pressão intra-ocular antes da injeção. Com o ângulo de injeção de 45 °, é menos provável de causar catarata traumática no olho do rato, evitando assim complicações relacionadas e influência de fatores lenticular. Nesta operação, não houve corte do músculo conjuntiva ocular e, sem sangramento. Com lesão rápido e menor, uma injeção intravítrea de sucesso pode ser feito em minutos.

A injeção set descritas neste protocolo específico é específico para injeção intravítrea. No entanto, os métodos e materiais aqui apresentados também podem ser usados ​​para outros procedimentos de injecção na entrega da droga para o cérebro, medula espinhal ou em outros órgãos pequenos mamíferos.

Protocolo

1. Prepare as pipetas de vidro usando extrator pipetas, conectá-lo a uma seringa de 1ml, e selar a conexão com parafilme. Retirar 2 ml de solução na ponta das pipetas e prepare-se para a injecção.
2. Anestesiar o rato por injeção intra-peritoneal de cetamina (80mg/kg) e xilazina (8mg/kg) (relação de volume de 2:1).
3. Aplique uma gota de Alcaine 0,5% para os olhos de ratos como anestésicos tópicos antes da injeção intravítrea.
4. Posicione o rato e expor a região nasal superior do olho.
5. Use uma agulha de calibre 30 para perfurar a esclera nasal superior ao nível do par plana. Evite tocar o músculo ocular e vasos.
6. Dê a pressão do globo ocular leve para se livrar de uma pequena quantidade de vítreo através do orifício de punção da câmara posterior.
7. Insira a ponta da pipeta de vidro através do orifício de punção em um ângulo de 45 ° através da esclera no corpo vítreo. Injetar 2 ml de solução para a câmara posterior e manter no local durante cerca de alguns segundos, em seguida, remova cuidadosamente a agulha. Evite tocar na lente e vasos intra-ocular.
8. Após a injeção intravítrea, aplique pomada oftálmica Tobrex sobre os olhos de ratos para prevenir a infecção.

Discussão

Injeção intravítrea bom é útil para estabelecer um modelo animal, bem como o tratamento intra-ocular directa. Primeiro, no local da injecção não deve perturbar a estrutura retina. Sangramento, segundo devem ser evitados para reduzir o risco de infecção. Lente, o terceiro deve ser intocável para evitar a catarata traumática. O mais importante é reduzir a interrupção da estrutura ocular normal.

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Microscópio cirúrgico	Olympus Corporation	OME
Pipetas de vidro	World Precision Instruments, Inc.
Puxador de pipetas	David Kopf Instruments
seringas de 1 ml			uso único
agulhas 30G			uso único
Ketamina	Aldasan		anestésico
Xilazina	Aldasan		anestésico
Alcaine	Alcon		cloridrato de proparacaína 0,5%
Tobrex	Alcon		pomada, tobramicina 3%.