Induzindo neuroinflamação em larvas de peixe-zebra com injeção de lipopolissacarídeo

Resumo

Fonte: He, Y. et al. Microinjeções ventriculares cerebrais de lipopolissacarídeo em larvas de peixe-zebra para avaliar a neuroinflamação e a neurotoxicidade. J. Vis. Exp. (2022).

O vídeo demonstra a microinjeção de lipopolissacarídeos (LPS) no cérebro de larvas de peixe-zebra para induzir neuroinflamação. As larvas são posicionadas em um prato forrado de agarose, a agulha é inserida nos ventrículos cerebrais e o LPS é injetado. O LPS injetado desencadeia uma resposta imune que leva à neuroinflamação.

Protocolo

1. Preparação para microinjeção

1. Prepare-se para a injeção puxando os capilares de vidro usando um extrator de micropipeta (consulte a Tabela de Materiais), seguindo o protocolo de cinco etapas para tração do tubo capilar de vidro (Tabela 1).
2. Abra a ponta da agulha (capilares de vidro de parede fina [3,5 pol] com filamento, diâmetro externo [OD] 1,14 mm) no tamanho apropriado em um ângulo usando uma pinça (Figura 1A).
3. Encha a agulha com 0,1 mL de óleo mineral para garantir que não haja bolhas.
4. Remova a tampa de rosca da agulha de aço do aparelho de microinjeção. Alinhe o orifí....

Resultados

Tabela 1: Protocolo de cinco etapas para tração de tubo capilar de vidro.

<.......

passo	Tempo de operação (seg)	Nível de calor	ação
T1	L>	H80-89	Pág. 1L005
T2	1.6-3	H00

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
agarose	Sigma-Aldrich	Resposta A6361
Agarose, baixa temperatura de gelificação	Sigma-Aldrich	A9414
Injetor Programável de Nanolitros Drummond Nanoject III	Drummond Científico	3-000-207
Microscópios estéreo de fluorescência	Leica	M205 FA
Lipopolissacarídeos de Escherichia coli O111:B4	Sigma-Aldrich	L3024
Micromanipulador manual	Instrumentos de precisão mundiais	M3301
Óleo mineral	Sigma-Aldrich	M5904
Solução salina tamponada com fosfato	Sigma-Aldrich	Pág. 4417
Capilares de vidro de parede fina (4") com filamento, OD 1,5 mm	Instrumentos de precisão mundiais	TW150F-4
Tricaína (éster etílico do ácido 3-aminobenzóico)	Sigma-Aldrich	A-5040