Neuropatologia

Para detectar atrofia cerebral, comece com slides carregando as seções cerebrais desparafinizadas de modelos de camundongos neurodegenerativos em várias idades.

Para visualizar esses NPs, pegue uma seção fixa do cérebro humano desparafinizada.

Adicione água bidestilada para lavar as seções.

Trate o tecido com tetróxido de ósmio para estabilizar as estruturas celulares, incluindo a lipofuscina.

Homogeneizar o tecido para liberar proteínas no tampão. Os inibidores de protease bloqueiam a atividade da protease, impedindo a degradação da proteína.

Adicione um tampão de carregamento contendo um detergente, um agente redutor e um corante de rastreamento.

Incubar com uma enzima proteolítica para digerir os príons normais, deixando intactos os agregados resistentes.

Incubar com solução de peróxido de hidrogênio para inibir as peroxidases endógenas e evitar manchas inespecíficas.

Essas seções contêm emaranhados neurofibrilares - agregados anormais da proteína tau encontrados nos neurônios do hipocampo.

Para visualizar o sulfato de heparano, comece com uma seção de tecido hipocampal humano doente contendo placas amilóides.

Centrifugue a amostra para granular detritos celulares e colete o sobrenadante.

Este protocolo descreve a extração de proteínas de células cancerígenas neuronais. As células são lavadas com um tampão e lisadas por meio de interrupção enzimática e mecânica. O sobrenadante rico em proteínas extraído é coletado após centrifugação.

Este vídeo demonstra o procedimento para coloração fluorescente de neurônios corticais de ratos para microscopia. Ele tem como alvo a F-actina e as proteínas dendríticas para analisar a integridade estrutural e calcular a densidade da F-actina, que é crucial para estudar a função e a saúde neuronal.

Este vídeo demonstra o protocolo para isolar fibrilas amilóides do extrato de tecido cerebral de camundongo usando centrifugação por gradiente de densidade e digestão de proteínas não amilóides.

Este vídeo descreve a geração de um modelo de lesão neuronal usando espécies reativas de oxigênio (ROS) em neurônios granulares cerebelares primários de camundongos. Ele detalha o processo de indução do estresse oxidativo adicionando altas concentrações de peróxido de hidrogênio. A exposição a ROS causa quebras de fita de DNA e instabilidade genômica. Além disso, a oxidação das proteínas celulares prejudica suas funções, enquanto a peroxidação lipídica compromete a integridade da membrana. Essa...

Este vídeo demonstra um método para avaliar os efeitos neurotóxicos das nanopartículas usando microglia. Ele descreve as etapas para ativar a microglia com nanopartículas, filtrar meios condicionados para isolar citocinas pró-inflamatórias derivadas da microglia e testar a toxicidade dos neurônios hipotalâmicos com os meios condicionados.

O vídeo demonstra a indução de neurodegeneração nos nervos segmentares da larva de Drosophila por meio de lesão mecânica. A cutícula ventral das larvas anestesiadas é pinçada com uma pinça para causar lesão aos nervos segmentares. As larvas lesadas são mantidas com alimentos, permitindo que a lesão cause degeneração dos neurônios motores nos nervos, causando ruptura de suas junções neuromusculares (JNMs).

Este vídeo demonstra um procedimento para criar um modelo de rato da doença de Parkinson injetando a neurotoxina 6-hidroxidopamina (6-OHDA) no cérebro. A infusão de neurotoxina no feixe do prosencéfalo medial (MFB) visa especificamente os neurônios dopaminérgicos responsáveis pelo controle motor, levando à sua destruição e replicando os sintomas da doença de Parkinson.

Neste vídeo, é demonstrado um protocolo passo a passo para células-tronco embrionárias humanas em organoides neurais. O método envolve a indução da formação de rosetas neuronais, seguida de maturação controlada e cultura final em uma membrana hidrofóbica para obter organoides neurais totalmente desenvolvidos.

Este vídeo demonstra a diferenciação de células-tronco embrionárias humanas (hESCs) em neurônios dopaminérgicos, para fornecer um modelo para estudar a doença de Parkinson. As hESCs são cultivadas em um meio de indução neural em uma placa de micropoços para formar neuroesferas 3D. Estes são então cultivados em um meio de indução neural para promover a diferenciação em neurônios progenitores dopaminérgicos. A maturação final dos neurônios ocorre em uma inserção de cultura sob condições de...

Este vídeo demonstra uma avaliação in vitro do colapso do cone de crescimento neuronal por agregados de β amilóide (Aβ). O tratamento dos neurônios com agregados Aβ causa desestabilização do citoesqueleto, levando ao colapso dos cones de crescimento na ponta dos axônios. As células tratadas são comparadas com as células de controle para avaliar a extensão do colapso do cone de crescimento.

O vídeo demonstra um procedimento para preparar fatias de cérebro cortical humano de pacientes com doença de Alzheimer para analisar a deposição de peptídeos beta-amilóide (Aβ) usando espectrometria de massa por imagem de ionização/dessorção a laser assistida por matriz (MALDI-IMS). As etapas incluem preparar as lâminas, tratar o tecido para aumentar a ionização e analisar a distribuição espacial dos peptídeos beta-amilóides.

Este vídeo demonstra a imunomarcação de neurônios tratados com agregados de alfa-sinucleína (αS). Os neurônios são tratados primeiro com agregados αS. Eles são então fixados, permeabilizados e tratados com uma solução de bloqueio. Anticorpos primários são adicionados, seguidos por anticorpos secundários marcados com fluorescência e uma coloração nuclear. A amostra é então montada e observada ao microscópio.

Este vídeo demonstra um procedimento para induzir degeneração da retina em peixes-zebra adultos usando lesão a laser. O laser tem como alvo as células fotorreceptoras da retina, desencadeando a morte celular e um processo degenerativo. Esse dano ativa as células da glia de Müller (MG), levando à sua desdiferenciação em progenitores de células-tronco que auxiliam na regeneração da retina.

Este vídeo demonstra o procedimento de injeção de peptídeos amilóides monoméricos no prosencéfalo de peixes-zebra adultos para gerar toxicidade amilóide, imitando o dano neuronal observado na doença de...

Este vídeo demonstra o protocolo para medir a ativação do receptor de odor em células transfectadas usando um biossensor de monofosfato de adenosina cíclico (cAMP) e detecção de luminescência. O método é aplicado para estudar interações receptor-ligante e vias de sinalização em neurônios olfatórios.

Este vídeo demonstra o procedimento para injetar peptídeos beta-amilóides, cloreto de alumínio e um fator de crescimento neuroinflamatório, que coletivamente auxilia na formação de placas amilóides tóxicas na região do hipocampo. Isso causa comprometimento da memória no rato, característico da doença de Alzheimer.

Este vídeo demonstra a infusão estereotáxica precisa de beta amilóide no giro dentado para estabelecer um modelo de camundongo da doença de Alzheimer. A determinação precisa de coordenadas e a entrega controlada de proteínas beta amilóides resultam em degradação neuronal, interrompendo o processamento da memória e contribuindo para o desenvolvimento da doença de Alzheimer.

Este vídeo demonstra a injeção de fibrilas de alfa-sinucleína em um camundongo para induzir neuroinflamação. As fibrilas são injetadas intraperitonealmente em um camundongo transgênico que expressa proteínas alfa-sinucleína mutadas. Ao atingir o sistema nervoso central, as fibrilas entram nos neurônios e induzem a agregação das proteínas mutadas. Os agregados se espalham para neurônios, micróglias e astrócitos vizinhos. O reconhecimento dos agregados desencadeia a micróglia para induzir...

Este vídeo demonstra o procedimento para imagens in vivo de C. elegans expressando proteínas semelhantes a príons marcadas com proteína fluorescente vermelha. O protocolo envolve a imobilização de nematóides em uma almofada de agarose para microscopia confocal de lapso de tempo, revelando agregação e transporte de proteínas dentro e entre as células. Essa técnica é crucial para o estudo da agregação de proteínas relacionadas a doenças neurodegenerativas.

Este vídeo demonstra o processo de injeção de um vetor viral na substância negra do rato para modelar a doença de Parkinson. Ele descreve as etapas para preparar o rato, microinjetar o vetor viral na substância negra e o procedimento de recuperação.

Este vídeo explica o processo de isolamento e enriquecimento de agregados de proteínas insolúveis em detergente do tecido cerebral humano post-mortem congelado. Ele demonstra as principais etapas, incluindo homogeneização, tratamento com detergente, sonicação e ultracentrifugação para separar e purificar os agregados insolúveis. A etapa final envolve a solubilização dos agregados em tampão de ureia para análise posterior.

Este vídeo demonstra imagens e quantificação de agregados de proteínas em cérebros de Drosophila geneticamente modificados. Os cérebros são fixados, lavados e tratados com um agente antidesbotamento antes da montagem. As imagens são capturadas usando um microscópio confocal e quantificadas para observar a transmissão de agregados de proteínas mutantes.

Este vídeo demonstra um protocolo para investigar a co-localização de receptores de orexina e canabinóides no tecido cerebral de peixe-zebra adulto normal e induzido por dieta (DIO) usando imunofluorescência.

Este vídeo demonstra o processo de quantificação do acúmulo de alfa-sinucleína em neurônios de dopamina embrionários de camundongos pré-tratados com fibrilas pré-formadas de alfa-sinucleína. Ele descreve as etapas para fixar, corar e quantificar os neurônios dopaminérgicos contendo agregados de alfa-sinucleína usando imunofluorescência.

Este vídeo demonstra como medir a atividade do proteassoma em diferentes compartimentos subcelulares da amígdala lateral a partir de cérebros de ratos condicionados pelo medo e de controle usando um ensaio de peptídeo fluorogênico. O proteassoma cliva o substrato do peptídeo fluorogênico, liberando moléculas fluorescentes, que são quantificadas usando um leitor de placas para avaliar a atividade do proteassoma nas frações de proteínas nucleares e sinápticas. O aumento da atividade nuclear...

Este vídeo demonstra o processo de indução de discinesias induzidas por levodopa em um modelo de rato com Parkinson, administrando levodopa junto com um inibidor de conversão de dopamina. Injeções repetidas superestimulam os neurônios cerebrais, resultando em disfunção motora.

Este vídeo demonstra a indução de dor neuropática orofacial em um modelo de rato pela ligação do nervo infraorbital. Isso resulta em danos e inflamação nos nervos, causando sinalização anormal da dor e mimetizando condições de dor crônica, que podem ser usadas para estudar o ensaio de dor orofacial.

Este vídeo demonstra o método de detecção de neurônios envelhecidos em seções organoides corticais por meio da coloração da atividade da beta-galactosidase, que é elevada em células senescentes. A enzima cliva um substrato para produzir um produto azul, seguido pela observação microscópica dos neurônios corados.

Este vídeo demonstra a geração de um modelo de camundongo desmielinizante focal usando uma injeção de lisofosfatidilcolina (LPC) de dois pontos. O crânio de um camundongo anestesiado é exposto. As coordenadas de injeção são determinadas e um orifício é perfurado para permitir injeções de LPC em locais específicos. O LPC induz a desmielinização focal dos neurônios por meio da inflamação, enquanto uma injeção de dois pontos garante sua sustentabilidade.

Este vídeo demonstra o processo de visualização de um interneurônio preenchido com biocitina em uma seção do hipocampo de ratos, destacando sua identidade neuroquímica por meio do uso de anticorpos específicos e microscopia de fluorescência.

Este vídeo demonstra a coloração imuno-histoquímica da proteína S-100 em seções de biópsia por sucção retal. As seções recuperadas de antígeno são bloqueadas e tratadas com anticorpos primários, seguidos por anticorpos secundários contra S-100, um marcador da doença de Hirschsprung. O substrato cromogênico é adicionado para corar as células-alvo. As amostras são desidratadas e montadas antes de serem visualizadas ao microscópio.

Este vídeo demonstra o método para induzir a desmielinização em neurônios da medula espinhal de camundongos usando injeções de lisolecitina, seguida de remielinização por meio da migração e diferenciação de células precursoras de oligodendrócitos. O processo prejudica e restaura gradualmente a transmissão do sinal neuronal.

Este vídeo demonstra o processo de transdução de células neuronais humanas com um lentivírus que codifica uma proteína tau humana mutante marcada com proteína fluorescente amarela (YFP) para estudar a agregação de proteínas. Ele descreve as etapas desde a entrada viral até a expressão da tau mutante, culminando na formação de agregados de tau citoplasmática visíveis nos neurônios.

Este vídeo demonstra a marcação de células neuronais com anticorpos para complexos da cadeia respiratória mitocondrial, proteína associada ao DNA mitocondrial e proteína da membrana externa mitocondrial, seguida de citometria de fluxo para quantificar seus níveis.

Este vídeo demonstra o procedimento de medição da atividade da γ-secretase em células humanas geneticamente modificadas usando um sistema induzível por tetraciclina. O processo envolve a indução da expressão do gene APP com tetraciclina, geração de peptídeos β amilóide e ativação da produção de luciferase. A bioluminescência resultante da reação luciferase-substrato é então medida, refletindo a atividade da γ-secretase.

Este protocolo descreve o uso de imuno-histoquímica para identificar regiões do locus coeruleus em seções cerebrais de camundongos. Ao direcionar a dopamina β-hidroxilase com anticorpos marcados com fluoróforo verde, os neurônios produtores de norepinefrina são visualizados como fluorescência verde ao microscópio.

O vídeo demonstra o processo de uso de uma sonda de microdiálise para coletar proteínas extracelulares do fluido intersticial (ISF) do cérebro de um camundongo. Uma sonda de microdiálise, equipada com uma membrana semipermeável de corte de alto peso molecular, é inserida no cérebro de um camundongo anestesiado por meio de uma cânula guia implantada. A sonda, conectada a bombas, permite que um tampão fisiológico perfunda o tecido cerebral e se misture com o ISF. As proteínas do FSI se difundem...

Este vídeo demonstra o método de indução de estresse crônico em um camundongo por meio de imobilização repetida, levando à liberação de corticosterona e redução da atividade do receptor de glutamato nos neurônios, o que resulta em comportamento semelhante à depressão.

Este vídeo demonstra o procedimento para preparar e tratar hemifatias de cérebro de rato com um peptídeo neurotóxico para imitar a neurodegeneração. O protocolo permite analisar eventos neurodegenerativos comparando diretamente os cortes controle e tratados no mesmo plano anatômico.

Este vídeo demonstra o uso de células ganglionares da raiz dorsal transfectadas para estudar a liberação de neurotransmissores, estimulando-as com um agonista do receptor neuropeptídico.

Este vídeo demonstra a coloração imuno-histoquímica de fibras colinérgicas no núcleo basal da região de Meynert de seções cerebrais de camundongos. As seções são bloqueadas e tratadas com anticorpos primários contra colina acetiltransferase, seguidos por anticorpos secundários biotinilados. São adicionados complexos avidina-biotina-peroxidase, que se ligam a anticorpos secundários, seguidos pelo substrato cromogênico. As seções são então desidratadas e montadas antes de serem visualizadas ao...

Este vídeo demonstra a avaliação da captação de dopamina em sinaptossomos colhidos de cérebros de camundongos. Ele descreve as etapas para preparar os sinaptossomos para a captação de dopamina por meio de transportadores de dopamina, tratando-os com concentrações variadas de dopamina radiomarcada, isolando os sinaptossomos e medindo a radioatividade para quantificar a captação de dopamina.

Este vídeo demonstra o procedimento para colorir fatias fixas de cérebro de rato contendo interneurônios cheios de biocitina. O protocolo inclui incubação com complexo avidina-biotina (ABC), coloração com HRP e substrato cromogênico, preservação de estruturas com tetróxido de ósmio e incorporação do tecido em resina para imagem.

Este vídeo demonstra a detecção da síntese de RNA do receptor de serotonina usando sondas de oligonucleotídeos no tecido cerebral de ratos afetado pela síndrome da serotonina. O protocolo inclui pré-tratamento de tecido, hibridização por sonda e detecção enzimática para visualizar e quantificar a expressão do RNA do receptor de serotonina ao microscópio.

Neste vídeo, uma fatia de cérebro cerebelar de camundongo foi usada para investigar interações sinápticas entre fibras paralelas, fibras trepadeiras e células de Purkinje, que são essenciais para o controle motor. A estimulação das fibras trepadeiras induziu depressão de longo prazo (LTD) nas células de Purkinje, enfraquecendo a força sináptica e resultando em resposta reduzida à estimulação paralela das fibras.

Este vídeo demonstra a coloração por imunofluorescência de um cérebro transgênico de Drosophila para imagens de células gliais de células únicas. O cérebro expressa proteínas direcionadas à membrana fundidas com diferentes combinações de epítopos antigênicos sob o controle de um sistema de recombinase específico da glia. Os cérebros isolados e fixados são corados com anticorpos primários específicos para os epítopos antigênicos, seguidos por anticorpos secundários conjugados com fluoróforo.

Este vídeo demonstra um procedimento cirúrgico guiado estereotaxicamente para ablação do córtex auditivo em um rato. As etapas incluem a identificação de pontos anatômicos em um rato anestesiado preso em uma estrutura estereotáxica, criando uma janela no crânio acima do córtex auditivo, aspirando as camadas corticais e fornecendo cuidados pós-operatórios para avaliar o impacto da ablação no processamento do som.

Neste vídeo, descrevemos o procedimento para realizar a coloração de fluorescência usando microscopia de fluorescência para demonstrar a coloração com faloidina de células da crista neural cultivadas em hidrogéis de rigidez variável para visualizar e analisar a organização do citoesqueleto.

Este vídeo demonstra a reticulação de proteínas de superfície neuronal usando suberato de bis-sulfossuccinimidil ou BS3. O cérebro isolado e resfriado do camundongo é seccionado coronalmente. A região desejada é extraída das seções, picada e tratada com BS3. O BS3 reticula proteínas de superfície como os receptores GABA, deixando as proteínas internas inalteradas. A reação é extinta com glicina antes de processar as amostras para análise posterior.

O vídeo demonstra uma técnica para medir a captação de glicose em neurônios motores larvais de Drosophila usando um sensor de glicose intracelular baseado em transferência de energia de ressonância de fluorescência (FRET). Depois de dissecar as larvas para expor o cordão nervoso ventral, os neurônios motores são visualizados através da fluorescência emitida pelo fluoróforo doador do sensor. Quando estimulado com glicose, o FRET entre os fluoróforos doadores e aceptores do sensor desencadeia a...

Este vídeo demonstra o procedimento para imunomarcar uma seção fixa de tecido cerebral de camundongo com astrócitos marcados com fluorescência usando anticorpos primários e secundários e capturar as imagens dos astrócitos corados por meio de microscopia confocal.

Este vídeo demonstra como isolar células de Purkinje de um tecido cerebelar humano post-mortem usando microdissecção por captura a laser.

Este vídeo demonstra um protocolo passo a passo detalhado para preparar seções congeladas de tecido cerebral de camundongo para análises a jusante.

Este vídeo demonstra o desenvolvimento de um modelo de cultura de órgãos pró-inflamatórios e degenerativos para doença do disco intervertebral (IVD) em estágio inicial usando TNF-α. Ele descreve o procedimento para injetar TNF-α no disco intervertebral e explica os mecanismos pelos quais o TNF-α induz inflamação e degradação do DIV.

Este vídeo demonstra a dissociação do tecido cerebral de rato congelado em uma suspensão unicelular usando digestão enzimática e trituração mecânica. As células preparadas são fixadas e permeabilizadas com etanol para aplicações a jusante, como citometria de fluxo ou análise de expressão gênica.

O vídeo demonstra a análise do estado de palmitoilação de proteínas da membrana celular isoladas do tecido cerebral de camundongos. O processo envolve expor as cisteínas não palmitoiladas e bloqueá-las, usando um polímero que se liga às cisteínas palmitoiladas, auxiliando na avaliação do estado de palmitoilação das proteínas isoladas.

Este vídeo demonstra um método para fabricar microesferas de polímero que encapsulam células secretoras de beta-amilóide neurotóxicas. A suspensão célula-polímero é processada por meio de um dispositivo de fabricação de microesferas, com gelificação de polímero obtida por meio de reticulação de cálcio, formando microesferas esféricas ao redor das células. O polímero permite a proliferação celular enquanto permite a liberação controlada e de longo prazo de beta-amilóide, simulando seu acúmulo na...

O vídeo demonstra um procedimento passo a passo para dissecar simetricamente um cérebro humano post-mortem fixo, preparando blocos de tecido menores para análise posterior.

Este vídeo demonstra o procedimento para avaliar a capacidade de retenção de cálcio mitocondrial monitorando as mudanças em tempo real na fluorescência à medida que as mitocôndrias captam cálcio. Este ensaio é útil para estudar a função mitocondrial e processos relacionados ao cálcio, incluindo apoptose e doenças neurodegenerativas.

Este vídeo demonstra o efeito da infusão contínua de drogas no cérebro do camundongo nos níveis de glicose no sangue. O metabolismo da glicose é avaliado coletando sangue da cauda de um camundongo em jejum e medindo os níveis de glicose antes e depois da administração oral de glicose. A tolerância à insulina é avaliada pela injeção de insulina no camundongo, com níveis de glicose registrados em intervalos específicos.

Neste vídeo, um rato anestesiado passa por um procedimento ocular onde esferas magnéticas são injetadas na câmara anterior sob um campo magnético para bloquear o ângulo iridocorneano. Esse bloqueio obstrui a malha trabecular, impedindo a drenagem do humor aquoso e levando ao aumento da pressão intraocular, danificando as células ganglionares da retina e o nervo óptico. Isso desenvolve uma condição semelhante ao glaucoma.

Fonte: Kummari, E., et. al., Microdissecção por captura a laser - Uma demonstração do isolamento de neurônios dopaminérgicos individuais e toda a área tegmental ventral., J. Vis. Exp. (2015)Neste vídeo, demonstramos o protocolo de imuno-histoquímica para neurônios dopaminérgicos em seções de tecido cerebral para posterior microdissecção de captura a laser.

Fonte: Bennett, S. A., et al., Caracterizando alterações de modificação pós-tradução de histonas em modelos de proteinopatia neurodegenerativa de levedura. J. Vis. Exp. (2019). Este vídeo demonstra o procedimento de avaliação de modificações de histonas em células de levedura que superexpressam proteínas neurodegenerativas. As etapas incluem lise celular, centrifugação, eletroforese, transferência de membrana e detecção baseada em anticorpos de histonas modificadas.

Fonte: Yan, Z., et al. Avaliando o efeito antidepressivo do Xiaoyaosan em camundongos com estresse crônico. J. Vis. Exp. (2019). O vídeo demonstra o processo de estabelecer um modelo de camundongo de depressão induzida por estresse crônico e avaliar comportamentos depressivos. A aplicação crônica de vários estressores desencadeia a liberação de corticosterona, levando à superexcitação neuronal e eventual morte neuronal, o que resulta em sintomas semelhantes aos da depressão nos camundongos.

Fonte: Bétemps, D., et al., Detecção de α-sinucleína associada à doença por ELISA aprimorado no cérebro de camundongos transgênicos que superexpressam α-sinucleína com mutação A53T humana. J. Vis. Exp. (2015). Este vídeo demonstra o procedimento para detectar a proteína α-sinucleína associada a doenças neurodegenerativas no tecido cerebral de camundongos transgênicos usando ELISA. As etapas incluem homogeneização tecidual, centrifugação e detecção ELISA da proteína α-sinucleína para...

Fonte: Wulf, M., et.al. Protocolo baseado em microdissecção a laser para a análise LC-MS/MS do perfil proteômico de grânulos de neuromelanina. J. Vis. Exp. (2021).Este vídeo demonstra a análise de amostras de peptídeos de grânulos de neuromelanina (NMGs) isolados de tecido cerebral humano post-mortem. Os peptídeos são primeiro separados usando cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC) e depois analisados por espectrometria de massa para determinar suas razões massa-carga (m/z). Os...

Fonte: Zhi, L. et al., Medição da Taxa de Consumo de Oxigênio em Fatias Estriatais Agudas de Camundongos Adultos. J. Vis. Exp. (2022). Este vídeo demonstra como medir a taxa de consumo de oxigênio mitocondrial (OCR) em fatias de cérebro estriado de camundongos. Ele detalha as etapas para preparar a placa de tecido e o cartucho do sensor, carregá-los no analisador de fluxo e explica os processos celulares subjacentes aos padrões de OCR.

Fonte: Josiah, S. S., et al. Estudo das funções e atividades do co-transportador neuronal K-Cl KCC2 usando Western Blotting. J. Vis. Exp. (2022). O vídeo demonstra as etapas para detectar e quantificar a proteína cotransportador 2 de cloreto de potássio fosforilada (KCC2) em um lisado celular. Este processo envolve imunoprecipitação para isolar KCC2 fosforilada e quimioluminescência para quantificar a proteína isolada.

Fonte: Lani-Louzada, R., et al. Cauterização de círculo completo do plexo vascular límbico para glaucoma induzido cirurgicamente em roedores. J. Vis. Exp. (2022). Este vídeo demonstra a quantificação de células ganglionares da retina de retinas de ratos quimicamente fixadas submetidas à cauterização de círculo completo do plexo vascular límbico. O processo inclui permeabilização, coloração de anticorpos e contracoloração nuclear, seguida de visualização sob um microscópio de epifluorescência...

Fonte: Jensen, V. N., et al. Medição repetida da atividade muscular respiratória e ventilação em modelos de camundongos com doença neuromuscular. J. Vis. Exp. (2017). Este vídeo demonstra o método para registrar sinais simultâneos de pletismografia e eletromiografia em um modelo de camundongo ALS em movimento livre. O procedimento envolve o uso de eletrodos implantados e um transmissor para capturar a atividade muscular, juntamente com uma câmara de pletismografia para monitorar os padrões...

Fonte: Jiang, X., et al. Indução e avaliação de um modelo murino de miopia experimental. J. Vis. Exp. (2019)Este vídeo demonstra um procedimento para induzir miopia em um mouse por meio da instalação de uma armação de lente personalizada. A armação é presa ao crânio exposto com adesivo dentário e lentes côncavas são inseridas para deslocar o ponto focal atrás da retina. Essa configuração estimula o alongamento do globo ocular, levando à miopia.

Fonte: Jolly, S., et.al. Combinando hibridização de fluorescência dupla in situ com imunomarcação para detecção da expressão de três genes em seções cerebrais de camundongos. J. Vis. Exp. (2016). Este vídeo demonstra o uso de hibridização in situ de fluorescência dupla para visualizar a expressão de dois alvos de RNA em seções cerebrais de camundongos. O protocolo envolve a detecção sequencial de RNA usando sondas marcadas com isotiocianato de fluoresceína e digoxigenina, seguida de...

Fonte: Baleriola, J., et. al., Detecção de mRNAs localizados axonalmente em seções cerebrais usando hibridização in situ de alta resolução. J. Vis. Exp. (2015)Este vídeo demonstra a detecção de mRNA dentro de axônios colinérgicos em fatias fixas de hipocampo de camundongo usando hibridização in situ fluorescente e coloração de anticorpos. A microscopia de fluorescência revela a localização espacial de mRNAs marcados com sonda e colina acetiltransferase em neurônios colinérgicos.

Fonte: Zhang, J., et al. Análise Quantitativa de Alta Resolução de Imunoouro de Receptores de Membrana em Sinapses de Fita Retiniana. J. Vis. Exp. (2016)Este vídeo demonstra uma técnica de microscopia eletrônica para visualizar a localização do receptor de neurotransmissor nas sinapses da retina. As seções da retina contêm células ganglionares da retina que exibem receptores de neurotransmissores ligados à membrana e são marcadas com a subunidade B da toxina da cólera (CTB). Ao marcar os...

Fonte: de March, C. A. et. al., Monitoramento in vitro em tempo real da ativação do receptor de odor por um odorante na fase de vapor. J. Vis. Exp. (2019)Este vídeo demonstra o método para monitorar a ativação em tempo real de receptores de odor em células recombinantes de mamíferos usando medição de luminescência. A ligação ao odorante desencadeia a ativação da proteína G e a produção de cAMP, ativando proteínas glosensor que emitem luminescência após a ligação ao substrato, fornecendo uma...

Fonte: Alluri, H., et al. Privação e reoxigenação de oxigênio-glicose como um modelo de lesão de isquemia-reperfusão in vitro para estudar a disfunção da barreira hematoencefálica. J. Vis. Exp. (2015). O vídeo demonstra a localização fluorescente de proteínas de junção apertada e fibras de estresse em células endoteliais microvasculares do cérebro de ratos (RBMECs). Na monocamada estressada, anticorpos marcados com fluorescência são usados para marcar as proteínas de junção apertada, enquanto a...

Fonte: Eid, L. & Parent, M. Preparação de tecido cerebral de primatas não humanos para imuno-histoquímica pré-incorporação e microscopia eletrônica. J. Vis. Exp. (2017). Este vídeo demonstra a preparação de tecido cerebral de primatas não humanos fixado em aldeído usando imuno-histoquímica pré-incorporada para microscopia eletrônica. Ele descreve as etapas para imunomarcar uma proteína neuronal específica, seguida por uma reação de peroxidase que produz um precipitado colorido, permitindo a...

Fonte: Evilsizor, M. N., et. al., Primer para imuno-histoquímica em tecido cerebral de rato criosseccionado: exemplo de coloração para microglia e neurônios. J. Vis. Exp. (2015)Este vídeo demonstra um procedimento de coloração imuno-histoquímica passo a passo em tecido cerebral de rato criosseccionado para visualizar o arranjo espacial da microglia e dos neurônios.

Fonte: Kirchner, K.N., et al., Um método hidrofóbico de limpeza de tecido para tecido cerebral de rato. J. Vis. Exp. (2020). Este vídeo demonstra o método de limpeza de tecido hidrofóbico de uma amostra de tecido cerebral de rato. A amostra é desidratada sequencialmente em metanol, tratada com uma mistura de diclorometano e metanol para dissolver lipídios e pigmentos e transferida para éter dibenzílico para limpeza completa do tecido, permitindo imagens detalhadas sem seccionamento fino.

Para detectar essas bactérias, faça uma seção do cérebro humano desparafinizado, reidratado e infectado por bactérias com antígenos proteicos expostos e fosfatase endógena inativada.

O vírus infecta neurônios piramidais no córtex cerebral e proteínas virais expressas localizam-se dentro de estruturas granulares intracitoplasmáticas conhecidas como corpos de inclusão.

Lave para remover a parafina e, em seguida, reidrate o tecido usando concentrações decrescentes de álcool.

Este vídeo demonstra o isolamento de proteínas intracelulares e de superfície celular de uma cultura de astrócitos. A cultura de astrócitos é colocada no gelo para inibir a endocitose e, em seguida, as proteínas da superfície celular são marcadas com um reagente de biotinilação. As células são lisadas para liberar as proteínas da superfície celular biotiniladas e as proteínas intracelulares não biotiniladas. Finalmente, grânulos revestidos com estreptavidina são usados para separar as proteínas...

Este vídeo demonstra o processo de injeção intracerebroventricular para estudar a distribuição do citomegalovírus murino (MCMV) no cérebro de camundongos neonatais. O MCMV, projetado para expressar uma proteína fluorescente verde aprimorada (EGFP) para visibilidade, é injetado no ventrículo lateral do cérebro de um filhote de camundongo. O vírus injetado circula pelo líquido cefalorraquidiano, infectando células na região periventricular, incluindo a zona marginal, o plexo coróide e a zona...

Este vídeo demonstra o estabelecimento de um modelo in vitro de infecção pelo zika vírus em um cérebro em desenvolvimento. Organoides cerebrais humanos contendo rosetas de células-tronco, células progenitoras neurais (NPCs) e neurônios são infectados com o vírus Zika. O vírus infecta NPCs e desencadeia a apoptose, interrompendo o desenvolvimento de organoides.

O vídeo demonstra a microinjeção de lipopolissacarídeos (LPS) no cérebro de larvas de peixe-zebra para induzir neuroinflamação. As larvas são posicionadas em um prato forrado de agarose, a agulha é inserida nos ventrículos cerebrais e o LPS é injetado. O LPS injetado desencadeia uma resposta imune que leva à neuroinflamação.

Este vídeo demonstra a avaliação da saúde mitocondrial em astrócitos geneticamente modificados, que expressam uma proteína fluorescente dentro de suas mitocôndrias. A proteína ajuda a rastrear mudanças na saúde mitocondrial à medida que sua fluorescência muda de verde para vermelho, indicando estresse ou dano. As imagens são capturadas e analisadas usando vários parâmetros.

Este vídeo demonstra o procedimento de injeção de vírus HIV quiméricos no córtex do cérebro de um rato, onde o RNA do vírus se integra ao genoma do hospedeiro, se replica e se espalha para estabelecer uma infecção ativa pelo HIV no modelo experimental.

Este vídeo demonstra a geração de um modelo de camundongo com uma infecção do SNC. Um filhote de leite é injetado com o vírus tanto intracraniana quanto intraperitonealmente. O vírus se espalha, infectando o SNC, causando morte e inflamação das células neuronais. O filhote é avaliado quanto a sintomas de infecção à medida que a doença progride.

Este vídeo demonstra a geração de neuroinflamação em um modelo de camundongo. Um camundongo anestesiado com microferidas é retirado e um inóculo do vírus da pseudo-raiva (PRV) é aplicado nas feridas. O vírus infecta os nervos periféricos, se espalha para os gânglios da raiz dorsal (DRG) e infecta ainda mais a medula espinhal e o cérebro. A infecção de neurônios no sistema nervoso leva a uma resposta imune que induz danos neuronais, levando à neuroinflamação.

O vídeo demonstra a injeção intracerebral da suspensão do zika vírus em um camundongo adulto para induzir a neurodegeneração. Um camundongo anestesiado é preso em uma estrutura estereotáxica e um orifício é perfurado no crânio exposto para injeção. Uma suspensão do vírus Zika é injetada no tecido cerebral. A infecção viral causa inflamação, levando à neurodegeneração.

Este vídeo demonstra a quantificação da carga bacteriana infecciosa do cérebro de camundongo perfundido infectado com Listeria monocytogenes.

Este vídeo demonstra um método para estudar a permeação através de um modelo de barreira hematoencefálica (BBB) in vitro usando astrócitos e células endoteliais em uma inserção de membrana, com ferritina carregada com FITC e FITC livre. A ferritina FITC se ligou aos receptores nas células endoteliais e atravessou a barreira da membrana para a câmara inferior, enquanto o FITC livre mostrou permeação restrita e permaneceu na câmara superior.

Este vídeo demonstra um procedimento para infectar células-tronco neurais fetais humanas com o vírus Zika. As células infectadas podem ser usadas para estudos adicionais.

Este vídeo demonstra um modelo in vitro para estudar patógenos que atravessam a barreira hematoencefálica (BBB). As células endoteliais microvasculares, que expressam junções apertadas, formam uma camada endotelial na câmara superior, enquanto neurônios, astrócitos e micróglia representam o parênquima cerebral na câmara inferior, separados por uma membrana porosa. A infecção por vírus no modelo BBB imita o patógeno que passa do sangue para o cérebro. Ao introduzir um vírus neurotrópico, ele...

Fonte: Funes, S., et. al., Células semelhantes à microglia humana: diferenciação de células-tronco pluripotentes induzidas e ensaio de fagocitose de células vivas in vitro usando sinaptossomos humanos. J. Vis. Exp. (2022)Este vídeo demonstra um ensaio para estudar a capacidade fagocítica de células semelhantes à microglia usando sinaptossomos marcados com corante fluorescente sensível ao pH.

Mergulhe o tecido em xileno para dissolver a parafina.

Injete albumina marcada com fluoróforo por via intravenosa, que atravessa a BHE danificada, atingindo o cérebro.

O tecido mostra fibrilas amilóides e agregados de proteínas anormais nas paredes dos vasos cerebrais, que são indicadores-chave de distúrbios neurológicos.

A MCCH é caracterizada pela redução do fluxo sanguíneo para o cérebro. Isso limita o suprimento de oxigênio e nutrientes para a camada de células endoteliais dos vasos sanguíneos cerebrais, danificando as células.

Suspenda a mistura celular em uma matriz extracelular ou solução ECM.

Faça uma incisão no pescoço para expor e ligar frouxamente as artérias carótidas comuns bilaterais.

Este vídeo demonstra o método de indução de encefalomielite autoimune experimental (EAE) injetando peptídeos derivados de mielina com um adjuvante para ativar células T autorreativas, que migram para o cérebro. A toxina da coqueluche é administrada para aumentar a permeabilidade da barreira hematoencefálica, permitindo que essas células T e outras células imunológicas entrem no cérebro. Essas células imunes causam desmielinização, levando ao comprometimento da transmissão nervosa e ao...

Este vídeo demonstra um procedimento para avaliar a ruptura da barreira hematoencefálica em um modelo de camundongo EAE. Corantes fluorescentes de diferentes tamanhos são injetados retroorbitalmente e circulam pelos vasos sanguíneos do cérebro. O corante menor vaza através de lacunas no tecido cerebral, enquanto o corante maior entra apenas se a ruptura for grave, correlacionando-se com a extensão do dano da barreira.

Este vídeo demonstra um procedimento para induzir dano tecidual ou infarto na ponte de um rato anestesiado usando estimulação elétrica.

Neste vídeo, embriões fertilizados de peixe-zebra são descorionados sob um microscópio estéreo e depois expostos a um inibidor da síntese de colesterol, levando ao desenvolvimento de rupturas de vasos sanguíneos e hemorragias cerebrais nas larvas. As larvas hemorrágicas, identificáveis por manchas vermelhas distintas, são posteriormente separadas ao microscópio para análise posterior.

Este vídeo demonstra o processo de indução da ruptura da barreira hematoencefálica (BHE) e micro-hemorragias cerebrais em um modelo de rato usando lipopolissacarídeo (LPS). Ele destaca a sequência de respostas imunes que levam ao aumento da permeabilidade da BHE e subsequente dano ao tecido cerebral.

Este vídeo demonstra um ensaio para detectar micro-hemorragias cerebrais (CMHs) em um modelo de rato. CMHs são sangramentos cerebrais devido à ruptura da barreira hematoencefálica, identificada por glóbulos vermelhos vazados (RBCs). Em um modelo de rato, o tecido cerebral fixo é crioprotegido, seccionado e corado com hematoxilina-eosina para hemácias, permitindo a visualização microscópica de CMHs. As hemácias vazadas aparecem como vermelho-laranja ao microscópio.

O vídeo demonstra o procedimento para criar um modelo de camundongo para estudar a lesão cerebral hipóxico-isquêmica neonatal. Ele descreve as etapas para induzir cirurgicamente a isquemia e submeter o animal à hipóxia para exacerbar o dano cerebral. Por fim, mostra como avaliar as lesões cerebrais resultantes, garantindo que o modelo de camundongo esteja preparado para uma investigação científica mais aprofundada.

Este vídeo demonstra como caracterizar o espaço extracelular em uma fatia cerebral usando microeletrodos seletivos de íons e iontoforese para medir e comparar sinais elétricos. Esse processo ajuda a determinar a fração de volume e o grau de torção do espaço.

Neste vídeo, um Multielectrode Array (MEA) revestido com glutamato oxidase é implantado no tecido cerebral de um ratinho anestesiado. A solução de glutamato é injetada no espaço extracelular onde o MEA detecta os níveis de glutamato, permitindo o monitoramento em tempo real da captação de glutamato pelos astrócitos.

Neste vídeo, um filhote de camundongo geneticamente modificado carregando o gene Ccm2 ladeado por locais loxP e Cre recombinase fundidos a um receptor de estrogênio é usado para induzir malformações cavernosas cerebrais (CCMs). A administração de 4-hidroxitamoxifeno ativa o Cre nas células endoteliais, levando à deleção de Ccm2 e à formação de CCMs no cérebro.

Este vídeo demonstra o procedimento para isolar células cerebrais e células imunes infiltradas de tecidos cerebrais isquêmicos de camundongos por digestão enzimática, seguida pela remoção de detritos celulares e mielina por centrifugação por gradiente de densidade, para estudar as respostas inflamatórias na pesquisa de AVC.

O vídeo demonstra a indução de hemorragia subaracnóidea por perfuração endovascular em um modelo de camundongo. Uma incisão é feita na região do pescoço do camundongo anestesiado para acessar a artéria carótida comum e sua bifurcação. Um filamento é inserido através das artérias para perfurar um ramo da artéria intracraniana, induzindo hemorragia subaracnoide.

Este vídeo demonstra um método para gerar um modelo de rato de hemorragia intraventricular neonatal. Neste procedimento, um filhote de rato anestesiado é injetado com hemoglobina no ventrículo lateral do cérebro. A hemoglobina causa estresse oxidativo e libera heme, simulando hemorragia intraventricular. O dano resultante aos tecidos cerebrais, impulsionado por espécies reativas de oxigênio e citocinas inflamatórias, leva ao aumento ventricular, uma consequência comum da hemorragia...

Este vídeo demonstra o procedimento de realização da oclusão permanente da artéria cerebral média distal, ou MCAO, com a artéria carótida comum, ou ligadura CCA, em ratos idosos para modelar o AVC isquêmico. Isso bloqueia o fluxo sanguíneo para o cérebro, levando à morte neuronal e gerando um modelo para estudar os mecanismos do AVC e possíveis tratamentos.

Este vídeo demonstra o procedimento para estabelecer um modelo de rato com hemorragia subaracnoide. Um rato anestesiado é implantado com sondas para medir a pressão intracraniana e o fluxo sanguíneo cerebral. O local alvo é identificado e a agulha é inserida em uma posição pré-quiasmática. O sangue autólogo é então injetado no espaço subaracnóideo, aumentando a pressão intracraniana e diminuindo o fluxo sanguíneo cerebral, estabelecendo o modelo.

Este vídeo demonstra uma investigação experimental da transmigração de linfócitos através de um modelo de endotélio de barreira hematoencefálica (BBB). Uma monocamada de células endoteliais microvasculares do cérebro humano (HBMECs) é gerada in vitro, e células mononucleares do sangue periférico (PBMCs) contendo linfócitos são adicionadas à monocamada. As células são então incubadas para permitir a transmigração de linfócitos e as células migradas são quantificadas usando citometria de fluxo.

Este vídeo demonstra a avaliação da zona de infarto e edema cerebral em fatias de cérebro de ratos submetidos à oclusão da artéria cerebral média. As áreas infartadas são identificadas usando coloração redox, enquanto um filtro azul e uma função de limiar no software de análise de imagem quantificam a zona de infarto e o edema no hemisfério afetado.

Este vídeo demonstra um método para avaliar a resistência elétrica transendotelial (TEER) em células endoteliais microvasculares do cérebro de camundongos in vitro. Um valor TEER alto indica junções de células endoteliais intactas, enquanto a adição de células T ativadas reduz o valor TEER, refletindo a ruptura da barreira juncional.

Este vídeo demonstra um procedimento para denervação simpática da artéria renal em um modelo de camundongo hipertenso induzido por angiotensina II, usando fenol para interromper a função nervosa simpática e reduzir a pressão arterial.

Este vídeo demonstra o processo de indução de AVC isquêmico em um modelo de rato por oclusão da artéria cerebral média (ACM) usando um parafuso de rosca. O procedimento envolve a ligação das artérias carótidas, a inserção de um parafuso de rosca na artéria carótida externa e o bloqueio do fluxo sanguíneo da ACM para o cérebro, levando à morte neuronal e imitando um acidente vascular cerebral isquêmico.

Este vídeo demonstra o procedimento de replicação de um acidente vascular cerebral trombótico em um modelo de camundongo, bloqueando a artéria carótida comum direita e expondo o camundongo a um ambiente com baixo teor de oxigênio. Esse processo reduz o fluxo de sangue e oxigênio para o cérebro, causando a formação de coágulos sanguíneos e danos cerebrais.

Este vídeo demonstra a técnica precisa para induzir um derrame da substância branca em um camundongo anestesiado, injetando um inibidor de óxido nítrico nas coordenadas cerebrais específicas dentro da substância branca. Isso leva à constrição dos vasos sanguíneos e à inibição do suprimento sanguíneo, resultando em danos neuronais e derrame cerebral.

Fonte: Wanderer, S., et al. Modelo de aneurisma de bifurcação microcirúrgica da bolsa arterial em coelho. J. Vis. Exp. (2020)Este vídeo demonstra a criação de um modelo experimental de aneurisma em um coelho usando uma bolsa de vaso tratada com elastase. Após a excisão de um segmento da ACC direita, a bolsa é tratada com elastase e, em seguida, suturada à ACC esquerda para restaurar o fluxo sanguíneo. O estresse resultante nas paredes enfraquecidas da bolsa induz a formação de aneurisma.

Fonte: Sharma, T. P., et al., Modelo de Sistema Autônomo Translaminar para a Modulação da Pressão Intraocular e Intracraniana em Segmentos Posteriores de Doadores Humanos. J. Vis. Exp. (2020). Este vídeo demonstra o procedimento de preparação de um olho humano para estudar os efeitos da pressão translaminar na sinalização das células ganglionares da retina, simulando as pressões intraoculares e intracranianas em um sistema autônomo translaminar.

Fonte: Lani-Louzada, R., et al., Cauterização de círculo completo do plexo vascular límbico para glaucoma induzido cirurgicamente em roedores. J. Vis. Exp. (2022)Este vídeo demonstra a indução e monitoramento da pressão intraocular (PIO) elevada em um modelo de rato. O processo envolve a cauterização dos vasos sanguíneos límbicos, resultando em oclusão do vaso e PIO elevada. O rato é então autorizado a se recuperar e a PIO é monitorada regularmente nos olhos experimental e de controle para...

Fonte: Jungen, C., et al. Impacto dos neurônios intracardíacos na eletrofisiologia cardíaca e arritmogênese em um sistema Ex vivo Langendorff. J. Vis. Exp. (2018). O vídeo demonstra uma técnica ex vivo para estimular o sistema nervoso intracardíaco para avaliar a suscetibilidade do coração à arritmia. Usando um aparelho de perfusão, um coração de camundongo isolado é perfundido com um tampão oxigenado. O sistema nervoso intracardíaco é então estimulado em alta frequência para induzir arritmias.

Fonte: Hakim, M. A. et al., Isolamento e Análise Funcional do Endotélio Arteriolar do Parênquima Cerebral de Camundongo. J. Vis. Exp. (2022). Este vídeo demonstra a análise funcional de um tubo endotelial arteriolar isolado de um cérebro de camundongo. Ele descreve as etapas para medir os níveis de cálcio intracelular e o potencial de membrana, tanto na linha de base quanto em resposta à estimulação farmacológica.

Fonte: Tang, X. et. al., Hemorragia Pontina Maciça por Injeção Dupla de Sangue Autólogo. J. Vis. Exp. (2021)Este protocolo descreve a infusão controlada de sangue autólogo na região pontina do cérebro de um rato para modelar hemorragia pontina maciça. O objetivo é simular um sangramento cerebral localizado aumentando a pressão localizada.

Fonte: Alluri, H., et.al. Privação e reoxigenação de oxigênio-glicose como um modelo de lesão de isquemia-reperfusão in vitro para estudar a disfunção da barreira hematoencefálica. J. Vis. Exp. (2015).O vídeo demonstra o impacto da privação de oxigênio-glicose e subsequente reoxigenação nas células endoteliais microvasculares do cérebro de ratos (RBMECs), simulando condições hipóxicas e carentes de nutrientes. Essas condições resultam em depleção de ATP, aumento do cálcio intracelular e geração...

Fonte: Gucciardo, E., et. al., Um modelo de cultura de tecidos ex vivo para complicações fibrovasculares na retinopatia diabética proliferativa. J. Vis. Exp. (2019)Este vídeo detalha um protocolo de imunocoloração para culturas ex vivo de tecido fibrovascular embebido em gel de fibrina. Isso permite a visualização detalhada das alterações vasculares associadas à retinopatia diabética...

Fonte: Talley Watts, L., et al. Fototrombose de Rosa Bengala por Imagem Óptica Confocal In Vivo: Um Modelo de AVC de Vaso Único. J. Vis. Exp. (2015)Este vídeo demonstra uma técnica para induzir a formação de coágulos sanguíneos no cérebro de um camundongo. Um camundongo anestesiado com uma janela craniana e um crânio afinado sofre fototrombose através da ativação de um corante fotossensível usando luz de alta intensidade. Esse processo gera espécies reativas de oxigênio, que danificam as...

Fonte: Kuts, R. et al. Lesão cerebral induzida por laser no córtex motor de ratos. J. Vis. Exp. (2020)Este vídeo demonstra a avaliação da integridade da barreira hematoencefálica (BHE) após lesão cerebral induzida por laser em ratos. Um corante de rastreamento é injetado na veia da cauda, permitindo que ele circule para o cérebro e vaze para o tecido através do BBB danificado. O cérebro é então extraído e processado para liberar o corante. A intensidade de fluorescência do corante é medida para...

Os astrócitos secretam moléculas de sinalização que aumentam a maturação e a diferenciação das células-tronco em neurônios e astrócitos.

Este vídeo mostra um método para testar a migração de interneurônios em resposta a pistas quimioatrativas de células endoteliais periventriculares (PVECs). Os interneurônios são colocados em um compartimento central, com PVECs e células de controle em ambos os lados. O aumento da migração para PVECs indica uma resposta positiva aos seus sinais quimioatraentes.

Este vídeo demonstra a coloração por imunofluorescência de fatias organoides cerebelares para identificar antígenos-alvo específicos expressos em vários neurônios cerebelares, que são indicativos de maturação organoide.

Este vídeo demonstra o método de identificação de neurônios de uma cultura mista de neurônios granulares cerebelares e células gliais usando coloração dupla com diacetato de fluoresceína (FDA) e iodeto de propídio (PI), onde os neurônios vivos aparecem em verde e os neurônios mortos aparecem em vermelho.

Este vídeo demonstra um protocolo de imunocoloração detalhado para visualizar defeitos fenotípicos nos corpos de cogumelos de cérebros mutantes de Drosophila. O protocolo envolve o uso de anticorpos contra Fas2, uma proteína envolvida na orientação axonal que facilita o desenvolvimento morfológico e funcional adequado do corpo do cogumelo.

Este vídeo demonstra o procedimento para colorir células-tronco neurais recém-proliferadas em seções de tecido cerebral usando incorporação de EdU, seguida de imunofluorescência para visualizar proteínas específicas, melhorando a compreensão da dinâmica e proliferação celular.

Este vídeo demonstra a coloração por imunofluorescência de criossecções de tecidos craniofaciais embrionários de camundongos, usando microscopia de fluorescência para avaliar a expressão de marcadores nucleares e determinar a proliferação celular e a atividade de sinalização.

Este vídeo demonstra como as vesículas neuronais são marcadas com proteínas fluorescentes específicas para visualizar seu movimento. Primeiro, um plasmídeo que codifica uma proteína fluorescente é incubado com um agente de transfecção e, em seguida, introduzido em uma cultura de neurônios. Posteriormente, imagens dos neurônios são adquiridas e analisadas para rastrear o movimento das vesículas.

Este vídeo demonstra a medição da secreção de ácido retinóico (AR) de células da neuroesfera usando células repórter RA. Ele descreve as etapas envolvidas na co-cultura de células da neuroesfera com células repórter de AR e na realização de um ensaio colorimétrico de AR para medir os níveis de AR.

Este vídeo demonstra a imunomarcação do trato gastrointestinal murino embrionário para visualizar e analisar a distribuição da população neuronal usando imunofluorescência e microscopia confocal.

Este vídeo demonstra a marcação viral e o transplante de células de eminência ganglionar medial (MGE) para estudos in vivo. Ele descreve as etapas envolvidas na transdução de células MGE com um repórter viral, transplantando essas células transduzidas para o córtex de um filhote de camundongo e permitindo a expressão do repórter em subtipos específicos de interneurônios.

Este vídeo demonstra o isolamento de núcleos ricos em receptores de ocitocina do cérebro de ratos neonatais. O corte coronal, seguido pela identificação e punção precisa dos núcleos cerebrais ricos em receptores de ocitocina, permite a extração eficaz de núcleos ricos em receptores de ocitocina para análise posterior.

Fonte: Pericoli, G. et. al., Ensaios de imunocitoquímica de células 3D vivas de glioma de linha média difusa pediátrica. J. Vis. Exp. (2021)Este vídeo demonstra imagens de células vivas para observar a migração de células de glioma de linha média difusa pediátrica usando marcação imuno-histoquímica com anticorpos anti-CD44.

Fonte: Jantzie, L. L., et. al. Modelagem de encefalopatia da prematuridade usando hipóxia-isquemia pré-natal com lipopolissacarídeo intra-amniótico em ratos. J. Vis. Exp. (2015)Este vídeo demonstra um protocolo para induzir condições hipóxico-isquêmicas e inflamatórias em ratos fetais, restringindo o fluxo sanguíneo uterino e injetando LPS, modelando neuroinflamação e desenvolvimento cerebral interrompido relevante para estudos de parto prematuro.

Fonte: Larpthaveesarp, A., et. al. Modelo transitório de oclusão da artéria cerebral média de acidente vascular cerebral neonatal em ratos P10. J. Vis. Exp. (2017)Este vídeo demonstra o estabelecimento do modelo de oclusão da artéria cerebral média em um filhote de rato. A artéria carótida interna (ACI) é exposta e uma ligadura é fixada para restringir a inundação do sangue. Um ocluído é inserido através da ACI para atingir a Artéria Cerebral Média. O filhote é então autorizado a se recuperar...

A doença desencadeia células imunes autorreativas para atacar proteínas de mielina, degradando a bainha de mielina ao redor dos axônios neuronais.

A seção de controle exibe axônios com bainhas de mielina compactadas contendo camadas concêntricas de membrana plasmática. A seção lesada exibe mielina descompactada com grandes lacunas.

O estresse prejudica a função dos oligodendrócitos, interrompendo a bainha de mielina rica em lipídios que envolve os axônios neuronais no córtex pré-frontal medial, uma região do cérebro que regula a emoção.

Este vídeo demonstra a imunoprecipitação de fragmentos de DNA reticulados com proteína-alvo de lisados de neurônios motores derivados de células-tronco usando esferas magnéticas revestidas com anticorpos específicos da proteína-alvo.

Este vídeo demonstra um protocolo para avaliar a integridade estrutural das junções neuromusculares nos músculos dorsais longitudinais de Drosophila. O procedimento envolve a coloração de neurônios e músculos com dois anticorpos distintos e a comparação de padrões de fluorescência entre moscas mutantes e selvagens. Uma redução na coloração neuronal em moscas mutantes indica neurodegeneração, enquanto a estrutura muscular permanece intacta.

Este vídeo demonstra a avaliação dos efeitos neurodegenerativos de um produto químico em Caenorhabditis elegans com neurônios marcados com fluorescência. Os neurônios normais mostram fluorescência brilhante do soma e processos intactos, enquanto a fluorescência diminuída, o soma inchado e os processos pontuados indicam neurodegeneração.

Este vídeo demonstra um método para estabelecer um modelo de neuropatia de pequenas fibras em camundongos usando o agonista TRPV1 resiniferatoxina (RTX). Ele descreve as etapas envolvidas na administração de RTX a camundongos e explica como o RTX induz a morte neuronal em neurônios sensoriais de pequeno diâmetro, estabelecendo assim o modelo de neuropatia.

Neste vídeo, um modelo de camundongo com esclerose múltipla é estabelecido usando encefalomielite autoimune experimental (EAE). O camundongo é injetado com uma emulsão contendo um peptídeo neuronal e um adjuvante, desencadeando uma resposta imune que ativa as células T autorreativas. Isso é seguido por uma injeção de toxina coqueluche (PTX) para aumentar a permeabilidade da barreira hematoencefálica, permitindo que as células T autorreativas se infiltrem no cérebro. Essa infiltração inicia uma...

Este vídeo demonstra o procedimento de indução de paralisia transferindo células Th17 ativadas direcionadas à aquaporina-4 para um modelo de camundongo. No sistema nervoso central, as células Th17 ativadas interagem com os astrócitos que expressam aquaporina-4, desencadeando uma resposta imune que leva à paralisia da cauda e dos membros no camundongo.

Este vídeo demonstra o processo de avaliação da disfunção motora em um modelo de camundongo por meio da administração de toxina coqueluche e um inóculo contendo peptídeos e adjuvantes que imitam a mielina, seguidos de testes em esteira para avaliar a função motora e avaliar o dano nervoso resultante devido à ativação imunológica e desmielinização.

Este vídeo demonstra o teste da escada para avaliar a função motora em um rato hemiparkinsoniano com lesão cerebral direita. A lesão interrompe a sinalização da dopamina, prejudicando o controle da pata esquerda, o que resulta em mais pellets remanescentes nas escadas esquerdas, indicando disfunção motora.

Este vídeo demonstra o uso de um ensaio de locomoção radial para avaliar a disfunção motora em C. elegans expressando a proteína TDP-43 humana do tipo selvagem ou mutante da ALS. Vermes com níveis variados de expressão de TDP-43 do tipo selvagem ou mutante podem rastejar, e seu movimento é medido pela distância radial percorrida a partir do ponto central na placa de ensaio. O ensaio distingue entre deficiências motoras leves, moderadas e graves com base na distância percorrida pelas diferentes...

Este vídeo demonstra a avaliação do músculo usando neurônios motores cultivados, células de Schwann e miotubos, seguido de tratamento com um bloqueador neuromuscular para inibir a contração. Gráficos de movimento de tempo codificados por cores mostram um gráfico de movimento de tempo codificado por cores. Vermelho indica o movimento mais rápido e azul indica o mais lento.

Este vídeo demonstra a visualização das interações proteína-proteína na junção neuromuscular (NMJ) Drosophila usando o Ensaio de Ligação de Proximidade (PLA). Depois de isolar as paredes do corpo, as proteínas que interagem são sondadas com anticorpos primários e anticorpos secundários conjugados com PLA. A proximidade das proteínas que interagem facilita a ligação de sondas com oligonucleotídeos conectores, formando DNA circular, que é então amplificado por amplificação de círculo rolante. As...

Fonte: Wagner, K. et al., Estudando o tráfego de proteínas de membrana em células fotorreceptoras de Drosophila usando proteínas marcadas com eGFP. J. Vis. Exp. (2022). Este vídeo demonstra a visualização do tráfego de proteínas de membrana em células fotorreceptoras de Drosophila usando proteínas TRPL marcadas com eGFP. Ele detalha a preparação de moscas transgênicas para imagens, a captura de imagens de fluorescência de células fotorreceptoras e a quantificação do tráfego de TRPL medindo a...

Fonte: Deseure, K., et al. Lesão por Constrição Crônica do Nervo Infraorbital do Rato (IoN-CCI) para Estudo da Dor Neuropática do Trigêmeo. J. Vis. Exp. (2015). Este vídeo demonstra um método para induzir dor neuropática em um modelo de rato por meio da constrição do nervo infraorbital. Depois de expor o nervo infraorbital e amarrar ligaduras para contraí-lo, a resposta imune no local da lesão aumenta a excitabilidade dos neurônios vizinhos, que transmitem sinais de dor ao cérebro.

Fonte: Brakkee, E. M., et al. Cirurgia e Teste Comportamental no Modelo de Transposição do Neuroma Tibial em Ratos. J. Vis. Exp. (2023). Este vídeo demonstra um procedimento para gerar um modelo de transposição de neuroma tibial de rato (TNT). Depois de expor o nervo tibial na perna traseira de um rato anestesiado, faça o transeccionamento do nervo. Em seguida, crie um túnel subcutâneo, passe o nervo cortado pelo túnel e suture-o no lugar. Na ausência de um alvo para reinervação, as...

Fonte: Lee, D. et. al., Condições experimentais modificadas para perda auditiva induzida por ruído em camundongos e avaliação da função auditiva e danos às células ciliadas externas. J. Vis. Exp. (2023)Este vídeo demonstra o procedimento de perda auditiva induzida por ruído em camundongos. O som de alto volume danifica as células ciliadas do ouvido interno e interrompe as vias auditivas, resultando em deficiência auditiva.

Fonte: Lee, D., et. al. Condições experimentais modificadas para perda auditiva induzida por ruído em camundongos e avaliação da função auditiva e danos às células ciliadas externas. J. Vis. Exp. (2023)Este vídeo demonstra a medição da resposta auditiva do tronco encefálico (ABR) em um camundongo. Os eletrodos são colocados na cabeça, atrás da orelha e perto da cauda de um camundongo anestesiado. Estímulos acústicos em várias intensidades são entregues e os sinais elétricos gerados são...

Fonte: Olmstead, D. N., et al., Axotomia do nervo facial em camundongos: um modelo para estudar a resposta do motoneurônio à lesão. J. Vis. Exp. (2015). Este vídeo demonstra o procedimento de esmagamento do nervo facial em um camundongo, onde a dissecção contundente através de pontos de referência importantes expõe o tronco do nervo facial no forame estilomastóideo. As pinças são então usadas para comprimir o tronco nervoso, induzindo danos axonais e interrompendo a transmissão do sinal...

Fonte: Cheah, M., et al. Injeção do gânglio da raiz dorsal e lesão por esmagamento da raiz dorsal como modelo para regeneração sensorial do axônio. J. Vis. Exp. (2017). Este vídeo demonstra um procedimento passo a passo para injetar uma suspensão viral nos gânglios da raiz dorsal (DRGs) e induzir uma lesão axonal controlada por meio de um esmagamento da raiz dorsal em um rato anestesiado. O protocolo envolve a exposição dos DRGs, a entrega de um vetor viral promotor de crescimento para...

Para detectar a morte celular apoptótica usando o ensaio TUNEL, trate a fatia do cérebro com a enzima proteinase-K.

Usando microscopia de fluorescência, visualize o nervo lesado, que exibe um aumento progressivo de inchaços e desconexões axonais.

O encapsulamento do medicamento aumenta a especificidade das células tumorais e reduz a neurotoxicidade.

Este vídeo demonstra a aplicação de traumatismo cranioencefálico (TCE) em camundongos. Depois de expor o crânio, o local do TCE é marcado. O mouse é então posicionado sob o dispositivo TBI. O impacto é feito levantando a haste de metal e permitindo que ela caia livremente sobre o impactor, que está em contato com o crânio.

Este vídeo demonstra a coloração por imunofluorescência de neurônios do hipocampo de ratos cultivados em um chip microfluídico para analisar a maturação e conectividade neuronal.

Este vídeo demonstra a geração de um modelo de lesão neuronal em neurônios granulares cerebelares primários de camundongos. Ele descreve as etapas envolvidas na indução de lesão neuronal usando NMDA, um agonista excitatório do receptor de neurotransmissor, e glicina, um co-agonista. O NMDA e a glicina se ligam a receptores neuronais específicos, causando sua superestimulação e resultando em um influxo maciço de cálcio intracelular, o que leva a danos e morte das células neuronais.

Este vídeo demonstra a coloração por imunofluorescência de uma fatia de cérebro de camundongo para quantificar a distribuição de uma proteína pré-sináptica específica. O processo envolve o bloqueio de locais inespecíficos, a aplicação de anticorpos primários para a proteína-alvo e um marcador de referência, seguido pela marcação de anticorpos secundários e contracoloração nuclear. O marcador de referência garante uma quantificação precisa, fornecendo uma linha de base consistente, e a...

Este vídeo demonstra um método para investigar lesões cerebrais em larvas de peixe-zebra usando microscopia eletrônica de transmissão de varredura (STEM) em larga escala, uma técnica que combina elementos de microscopia eletrônica de varredura (SEM) e microscopia eletrônica de transmissão (TEM) para produzir imagens de alta resolução. Ele descreve as etapas envolvidas na preparação de amostras e na aquisição de imagens STEM de alta resolução para identificar lesões cerebrais.

Este vídeo demonstra um protocolo cirúrgico em um modelo de rato, detalhando as etapas desde a preparação da anestesia até a indução da lesão do nervo facial. Este protocolo é útil para estudar a regeneração nervosa e técnicas cirúrgicas em pesquisas médicas.

Este vídeo demonstra o procedimento para induzir uma lesão cerebral traumática de crânio aberto em um camundongo, fazendo uma incisão na linha média do crânio, perfurando o crânio e removendo a aba óssea para expor o córtex cerebral e aplicando alta pressão para induzir trauma. A ferida é então suturada para preparar o modelo de camundongo para experimentos subsequentes.

Este vídeo demonstra o procedimento para induzir a morte encefálica em um modelo de camundongo, aumentando a pressão intracraniana controlada por meio de um cateter de balão, imitando a morte encefálica natural.

Este vídeo demonstra um procedimento para gerar lesões cerebrais precisas e controladas no córtex motor de ratos usando um laser.

Este vídeo demonstra a biotinilação e marcação fluorescente de sialoglicoproteínas modificadas em células-tronco neurais primárias e progenitoras, bem como neurônios, e sua visualização usando microscopia de fluorescência.

Neste vídeo, um dispositivo de tubo de choque é usado para gerar uma onda de choque rompendo um diafragma de polímero por meio de pressurização controlada. A onda de choque afeta fatias de cérebro contidas em uma bolsa segura, induzindo lesão traumática na fatia de cérebro.

Este vídeo demonstra o procedimento para preparar neurônios cultivados para análise óptica de vesículas sinápticas recicladas. O processo envolve marcação de fluorescência de proteínas de vesículas sinápticas e imunocoloração para rotular e visualizar as vesículas recicladas dentro dos neurônios.

Este vídeo demonstra o processo de indução de lesão por estiramento em neurônios derivados de células-tronco pluripotentes induzidas por humanos (hiPSCNs). As células são retiradas em uma placa sem fundo de vários poços com uma membrana de silicone conectada. O estresse mecânico controlado é aplicado na membrana para induzir a ruptura do citoesqueleto e danos à membrana celular, induzindo um fenótipo de lesão por estiramento nas células.

Este vídeo demonstra um procedimento para infligir uma lesão traumática de cabeça fechada em moscas Drosophila anestesiadas usando um dispositivo de ataque com um impactador movido a gás. A lesão afeta a função neuronal e prejudica a capacidade de caminhar.

Este vídeo demonstra o procedimento de lesão por facada cortical em camundongos, envolvendo exposição do crânio e criação de lesões cerebrais. Induz a astrogliose reativa, uma resposta neuroprotetora dos astrócitos, para estudar o trauma, a inflamação e os mecanismos de reparo do SNC.

O vídeo demonstra um método para gerar um modelo de camundongo de lesão cerebral traumática (TCE) usando um dispositivo de percussão de fluido lateral (LFPI). Ao anestesiar o mouse, o cérebro é exposto criando uma janela no crânio. Uma cânula cheia de solução salina é conectada à janela e então conectada ao LFPI. O pêndulo do dispositivo é liberado para criar um pulso de pressão que inflige uma lesão cerebral traumática.

Este vídeo demonstra o procedimento para induzir traumatismo cranioencefálico (TCE) em um modelo de camundongo. Um camundongo anestesiado com o crânio exposto é levado para criar uma abertura no crânio e, em seguida, uma lesão cortical controlada é induzida usando um dispositivo de impacto. A lesão danifica o tecido cerebral, causando comprometimento da função cognitiva e da coordenação motora.

Este vídeo demonstra o procedimento cirúrgico para a realização de uma hemissecção da medula espinhal torácica em ratos. Ele descreve as etapas para expor o segmento da medula espinhal T8, realizar a hemissecção para interromper o trato neural de um lado e fornecer cuidados pós-operatórios.

Este vídeo demonstra um método para induzir lesão neuronal direcionada em larvas de Drosophila usando um laser de alta potência. Depois de posicionar a larva sob um microscópio, um laser de baixa potência procura neurônios fluorescentes e, em seguida, a potência do laser é aumentada para induzir danos localizados. A lesão é confirmada pelo aumento da fluorescência e uma cratera no local da lesão.

O vídeo demonstra o uso de um dispositivo de trauma de alto impacto (HIT) para induzir traumatismo cranioencefálico (TCE) de cabeça fechada em Drosophila. O TCE causa trauma cerebral mecânico que afeta a função neuronal, o que, com o tempo, leva à neurodegeneração e mortalidade.

Este vídeo demonstra a indução de lesão cerebral traumática penetrante no cérebro da drosófila. As moscas recém-emergidas são selecionadas, anestesiadas e posicionadas sob um microscópio estéreo equipado com fluorescência. O corpo do cogumelo que expressa GFP é identificado e um pino Minutien é inserido para causar ferimentos. As moscas podem se recuperar para estudos posteriores.

Fonte: Shandra, O. et al., Induzindo epilepsia pós-traumática em um modelo de camundongo de lesão cerebral traumática difusa repetitiva. J. Vis. Exp.

Este vídeo demonstra a indução de lesão cerebral traumática (TCE) em um rato usando um dispositivo de lesão por percussão de fluido lateral (FPI). O procedimento envolve a criação de um orifício no crânio de um rato anestesiado para expor a dura-máter, na qual uma cânula é fixada. O rato é então conectado ao dispositivo, que gera uma onda de pressão que atinge o cérebro, imitando o TCE, causando morte de células neurais e danos...

Fonte: Yang, Z., et.al. Um modelo repetitivo de traumatismo craniano concussivo em camundongos. J. Vis. Exp. (2016). Este vídeo demonstra a indução de lesões repetitivas e concussivas na cabeça em um mouse usando um dispositivo de impacto eletromagnético. O procedimento envolve posicionar a ponta de impacto entre as suturas interfrontal e lambdoide no crânio de um camundongo anestesiado e usar uma ponta de sonda para definir com precisão a profundidade do impacto. O impacto é aplicado em...

Fonte: Logsdon, A. F., et al. Modelo de onda de choque de baixa intensidade para avaliação pré-clínica de lesão cerebral traumática leve de cabeça fechada em roedores. J. Vis. Exp. (2020)Este vídeo demonstra a indução de lesão cerebral traumática leve na cabeça fechada em um modelo de camundongo usando uma configuração de tubo de choque de gás pressurizado. A onda de pressão gerada rompe a membrana de poliéster, entregando uma onda de choque na cabeça do camundongo que resulta em um rápido...

Fonte: Macheda, T., et. al. Modelo de cabeça fechada controlado eletromagnética de lesão cerebral traumática leve em camundongos. J. Vis. Exp. (2022)Este vídeo demonstra o procedimento para induzir um traumatismo craniano fechado em um modelo de camundongo usando um quadro estereotáxico. O impacto controlado replica lesões cerebrais traumáticas leves, permitindo que os pesquisadores estudem os efeitos neurológicos e a recuperação medindo os reflexos e o comportamento pós-lesão.

Fonte: Elzat, E. Y. Y., et al., Estabelecendo um modelo de lesão medular por contusão em camundongos com base em uma técnica minimamente invasiva. J. Vis. Exp. (2022). Este vídeo demonstra o método para induzir uma lesão de contusão na medula espinhal no nível T9 em um modelo de camundongo, usando uma plataforma coaxial de lesão da medula espinhal. Um peso é colocado na medula espinhal de nível T9 que cria uma contusão que causa imediatamente descoloração e inchaço do tecido.

Fonte: Lakshman, N., et al. Um ensaio de neuroesfera para avaliar a ativação endógena de células-tronco neurais em um modelo de camundongo com lesão mínima da medula espinhal. J. Vis. Exp. (2018). Este vídeo demonstra a ativação e migração de células-tronco neurais (NSCs) em um modelo de lesão medular de camundongo. Para expor a medula espinhal, uma vértebra da região torácica da coluna vertebral é removida de um camundongo anestesiado. Uma lesão superficial é então criada na substância branca...

Fonte: Kumar, S., et. al. Modelo de camundongo de úlceras por pressão após lesão medular. J. Vis. Exp. (2019)Este vídeo demonstra uma indução detalhada de lesão medular em camundongos. O camundongo anestesiado é dissecado para expor as vértebras T9-T10 e seus processos espinhosos são removidos. A medula espinhal exposta é então seccionada para infligir a lesão. A área cirúrgica é então fechada e o camundongo pode se recuperar.

Este vídeo demonstra um método para avaliar a internalização da proteína-alvo nos astrócitos corticais de camundongos usando biotinilação, seguida de lise celular, extração de proteína à base de estreptavidina, desnaturação e análise de Western blot para confirmar a internalização bem-sucedida.

Este vídeo demonstra um método para avaliar a atividade proteica usando neurônios do hipocampo sobre zonas de proteína padronizadas. Os neurônios exibem repulsão nas zonas de proteína de teste e ligação nas zonas de proteína de controle, destacando os efeitos da atividade de proteína atrativa ou repulsiva.

Este vídeo demonstra a indução do glaucoma em um rato anestesiado pela injeção de solução salina hipertônica na veia episcleral. A solução salina entra na malha trabecular através do canal de Schlemm, causando cicatrizes nos tecidos, que bloqueiam a saída do humor aquoso e aumentam a pressão intraocular. A pressão elevada danifica as células ganglionares da retina, levando ao glaucoma.

Homogeneizar o tecido com um homogeneizador para liberar proteínas, incluindo ácido glutâmico descarboxilase, ou isoformas da enzima GAD, essenciais para a função cerebral.

Este vídeo demonstra o procedimento de acesso cirúrgico ao nervo óptico em um animal anestesiado e entrega precisa de lisolecitina para induzir a desmielinização focal, criando condições neuropatológicas para estudos posteriores.

Incube a fatia em aCSF contendo falsos neurotransmissores fluorescentes ou FFNs.

Este vídeo demonstra a indução de convulsões induzidas pelo manuseio em um camundongo infectado com o vírus da encefalomielite murina de Theiler (TMEV). O camundongo infectado, que possui neurônios hiperexcitáveis, é exposto a estímulos físicos externos. Essa exposição causa estresse, levando a uma atividade elétrica anormal nos neurônios, o que resulta em convulsões.

Este vídeo demonstra o procedimento para induzir convulsões induzidas pelo calor em um camundongo transgênico com mutações genéticas relacionadas à epilepsia, aumentando gradualmente a temperatura corporal em uma câmara controlada. Este protocolo é usado para estudar mecanismos de convulsão e possíveis terapias para epilepsia.

Este vídeo demonstra a indução de eventos ictais em fatias corticais coronais de um camundongo transgênico expressando canais catiônicos ativados por luz em neurônios piramidais excitatórios corticais. A fatia é colocada em uma câmara de registro e um eletrodo de registro é inserido na camada cortical superficial. Após a perfusão com uma droga indutora de convulsões que bloqueia os canais de potássio, os neurônios tornam-se hiperexcitáveis e geram eventos ictais espontâneos. Para gerar eventos...

Este vídeo demonstra o processo de indução de epilepsia em camundongos usando injeções de pentilenotetrazol (PTZ), um antagonista do receptor GABA-A. A administração intraperitoneal repetida de PTZ reduz progressivamente o limiar convulsivo, inibindo o influxo de íons cloreto, interrompendo a neurotransmissão inibitória e levando à hiperexcitabilidade nos neurônios que desencadeiam convulsões. Esse processo resulta em inflamações e no desenvolvimento de convulsões espontâneas, imitando a...

Fonte: Soukupová, M., et al. Microdiálise de aminoácidos excitatórios durante registros de EEG em ratos em movimento livre. J. Vis. Exp. (2018)Este vídeo demonstra a avaliação dos níveis de neurotransmissores excitatórios extracelulares em ratos com indução de epilepsia crônica. Após a implantação de uma sonda de microdiálise no cérebro e a confirmação da ausência de convulsões por meio de eletroencefalografia (EEG), o fluido extracelular é coletado para avaliar níveis elevados de...

Fonte: Schönherr, S., et. al. Imunomarcação Combinada de Réplica Optogenética e de Fratura por Congelamento para Examinar o Arranjo Específico de Entrada de Receptores de Glutamato na Amígdala de Camundongo. J. Vis. Exp. (2016)Este vídeo demonstra a imunomarcação de réplicas fraturadas por congelamento de tecido cerebral de camundongo para microscopia eletrônica. As réplicas fraturadas e revestidas são digeridas para expor os receptores. Anticorpos primários e secundários marcados com ouro são...

Neste vídeo, as células de glioblastoma e microglia são misturadas com uma solução de matriz polimérica e transferidas para uma inserção de câmara porosa onde um gel se forma, incorporando as células. A microglia estimula a migração das células de glioblastoma através da inserção porosa, imitando a invasão de células tumorais no tecido circundante, As células são então fixadas e preparadas para análise posterior.

Neste vídeo, é demonstrado um método para permitir a transferência de mitocôndrias marcadas com fluorescência para células-tronco de glioblastoma (GSCs) por meio de centrifugação. A captação bem-sucedida e a integração funcional das mitocôndrias do doador são confirmadas pela detecção da fluorescência usando microscopia confocal.

Fonte: Guyon, J., et al. Um modelo esferóide 3D para glioblastoma. J. Vis. Exp. (2020)O vídeo demonstra a geração de um modelo esferóide tridimensional de invasão de células tumorais. Os esferóides são formados a partir de células tumorais cerebrais humanas e incorporados em uma matriz de colágeno. As células tumorais na periferia esferóide adotam um fenótipo invasivo, secretando proteases para degradar o colágeno e avançando para invadir a matriz circundante.

Fonte: Lim, M., et al. Modelagem de metástases cerebrais por injeção de células cancerígenas na artéria carótida interna. J. Vis. Exp. (2022)Neste vídeo, um camundongo anestesiado é submetido a um procedimento cirúrgico no qual células cancerígenas são injetadas na artéria carótida comum (CCA) para facilitar a entrega direcionada ao cérebro. O procedimento envolve sutura e manipulação precisas das artérias carótidas para direcionar as células injetadas para a artéria carótida interna (ACI),...

Fonte: Ear, P. H., et. al. Estabelecimento e caracterização de esferóides tumorais neuroendócrinos do intestino delgado. J. Vis. Exp. (2019)Este vídeo demonstra a coloração por imunofluorescência de esferoides de tumores neuroendócrinos do intestino delgado. Os esferoides são fixados, permeabilizados e bloqueados e são então incubados com anticorpos primários e secundários. Um corante é adicionado para corar os núcleos antes de montá-los e visualizá-los sob um microscópio fluorescente.

Fonte: Mudduluru, G., et. al. Medição em tempo real baseada em impedância da migração e invasão de células cancerígenas. J. Vis. Exp. (2020)Este vídeo demonstra um ensaio baseado em impedância para medir a invasão e migração de células de glioblastoma. As células degradam a matriz extracelular, movem-se através de membranas microporosas e aderem a eletrodos, gerando impedância. Esta análise em tempo real reflete seu potencial invasivo para aplicações de pesquisa do câncer.

Fonte: Bolcaen, J., et. al., irradiação guiada por PET e ressonância magnética de um modelo de rato com glioblastoma usando um micro-irradiador. J. Vis. Exp. (2017)Este vídeo demonstra o procedimento para estabelecer um modelo de rato glioblastoma injetando estereotaticamente células de glioblastoma causadoras de tumor cerebral no córtex pré-frontal.

Fonte: Mendez, F. M. et al., Imunoprecipitação de cromatina nativa usando neuroesferas de tumor cerebral murino. J. Vis. Exp. (2018). Este vídeo demonstra o isolamento de complexos proteína-DNA de células neuroesféricas derivadas de um tumor cerebral de camundongo usando imunoprecipitação de cromatina nativa. Ele detalha as etapas de preparação da cromatina, imunoprecipitação, lavagem e digestão de proteínas para liberar DNA para análise posterior.

Fonte: Núñez, F. J., et al. Avaliação de biomarcadores em glioma por imuno-histoquímica em culturas de neuroesferas de glioma 3D embebidas em parafina. J. Vis. Exp. (2019). Este vídeo demonstra uma técnica imuno-histoquímica para rotular biomarcadores tumorais em neuroesferas tumorais cerebrais embebidas em parafina. As seções da neuroesfera são submetidas à remoção e reidratação da parafina, seguida de tratamento para expor os locais dos biomarcadores. Anticorpos primários e secundários são...