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Quantificando a distribuição de uma proteína pré-sináptica no cérebro de camundongos usando imunofluorescência

July 8th, 2025

In This Article

Abstract

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Fonte: Wallrafen, R., et al. Quantificando a distribuição heterogênea de uma proteína sináptica no cérebro de camundongos usando imunofluorescência. J. Vis. Exp. (2019).

Este vídeo demonstra a coloração por imunofluorescência de uma fatia de cérebro de camundongo para quantificar a distribuição de uma proteína pré-sináptica específica. O processo envolve o bloqueio de locais inespecíficos, a aplicação de anticorpos primários para a proteína-alvo e um marcador de referência, seguido pela marcação de anticorpos secundários e contracoloração nuclear. O marcador de referência garante uma quantificação precisa, fornecendo uma linha de base consistente, e a distribuição da proteína pré-sináptica é analisada nas regiões do cérebro usando microscopia confocal.

Protocol

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Todos os procedimentos envolvendo amostras de animais foram revisados e aprovados pelo comitê de revisão ética animal apropriado.

1. Imunofluorescência

  1. Prepare soluções incluindo o tampão de bloqueio, tampão de anticorpos, tampão de lavagem 1 e tampão de lavagem 2 (consulte a Tabela 1).
  2. Enxágue as fatias uma vez com tampão fosfato (PB) para remover o excesso de composto de temperatura de corte ideal (OCT).
    1. Remova a solução com uma pipeta de plástico sem sugar as fatias de cérebro. Adicione 250 μL de PB fresco com uma pipeta de 1000 μL.
      cuidado: As f....

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Disclosures

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Não há conflitos de interesse declarados.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
Tubos de reação de 1,5 mLEppendorf30120094
Tubos de reação de 50 mLGreiner Bio-One227261
poço múltiplo 24 poçoFisher Científico087721H
pipeta de plástico (descartável)Sarstedt8,61,176
Pipeta de 1000 mLRainin17014382
Pipeta de 2 mlEppendorf3123000012
Gênio do Vórtice 3IKA3340001
Lâminas de microscópio MenzelFisher Científico10144633CF
EstereoscópioLeica
LSM800ZeissMicroscópio confocal
PBS (10X)Roche11666789001
Tecido TekSakuraNº 4583Outubro
Na2HPO4BioFroxx5155KG001
NaH2PO4Merck1,06,34,60,500
soro de cabra normalMerck MilliporeS26-100ML
soro de burro normalMerckS30-100ML
Tritão X-100Merck1,08,60,31,000
coelho anti-MoverSistemas sinápticosRRID: AB_10804285
cobaia anti-sinaptofisinaSistemas sinápticosRRID: AB_1210382
anti-coelho para burros AF647Jackson ImmunoResearchRRID: AB_2492288
anti-rato para cabras AF488Jackson ImmunoResearchRRID: AB_2337438
Mowiol4-88Calbioquímica475904
Software azul ZEN2ZeissSoftware de microscopia
FijiImagemJSoftware de análise
Microsoft ExcelMicrosoft

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